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申请/专利权人：深圳细胞谷生物医药有限公司;深圳北京中医药大学研究院
摘要：本发明提供一种CD19基因敲除的Raji‑Luc细胞系构建方法，所述方法包括以下步骤：设计靶向CD19的多个sgRNA序列，用多个sgRNA序列构建多个PB‑CRISPR‑CD19sgRNA质粒，用多个PB‑CRISPR‑CD19sgRNA质粒分别电转染Raji‑Luc细胞，用流式细胞仪检测电转染后Raji‑Luc细胞的CD19敲除效率和利用细胞培养确定细胞生长状态，筛选出最优的sgRNA序列，用最优的sgRNA序列构建的PB‑CRISPR‑CD19sgRNA质粒批量电转染Raji‑Luc细胞，和筛选稳定敲除的单克隆Raji‑Luc细胞株。本发明所构建的CD19基因敲除的Raji‑Luc细胞可以模拟肿瘤复发后抗原低表达甚至不表达的情况，荧光素酶基因的表达让后续研究人员可以在体内环境中对肿瘤进行长期观察和检测。
主权项：1.CD19基因敲除的Raji-Luc细胞系构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤1：设计靶向CD19的多个sgRNA序列；步骤2：用步骤1的多个sgRNA序列构建多个PB-CRISPR-CD19sgRNA质粒；步骤3：用步骤2的多个PB-CRISPR-CD19sgRNA质粒电转染Raji-Luc细胞；步骤4：用流式细胞仪检测步骤3得到的电转染后Raji-Luc细胞的CD19敲除效率和利用细胞培养确定细胞生长状态，筛选出最优的sgRNA序列；步骤5：利用最优的sgRNA序列构建的PB-CRISPR-CD19sgRNA质粒批量电转染Raji-Luc细胞；步骤6：筛选稳定敲除的单克隆Raji-Luc细胞株。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 深圳细胞谷生物医药有限公司 深圳北京中医药大学研究院 CD19基因敲除的Raji-Luc细胞系构建方法及其细胞系
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