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申请/专利权人：湖南科技大学

摘要：一种基于杂交链式反应（HCR）的鱼类病原微生物嗜水气单胞菌16SrRNA基因检测试剂盒及其应用，包括测定的嗜水气单胞菌特异性DNA序列16SribosomalRNA、以及一对发夹引物16SrRNA‑H1与16SrRNA‑H2、荧光基团、猝灭基团、DNA储存液、CaCl2溶液。使用时，取水体样本或由患病鱼类脏器组织分离制得的菌液加入H1与H2引物；先于冰上静置，再42℃恒温热激；热激后迅速置于冰上冷却，加入DNA储存液后室温放置后使用荧光显微镜进行检测。通过观察荧光显微镜下样本发光情况，判断该待测样本中是否含有的嗜水气单胞菌，以及所含致病菌体的比例。本发明实现了对待测样品中所含有的鱼类病原微生物嗜水气单胞菌的简易快速检测。本方法提高了鱼类病原微生物的检测效率，具有很大的应用潜力。

主权项：1.基于杂交链式反应（HCR）鱼类病原微生物嗜水气单胞菌16SrRNA基因的检测试剂盒，包括根据目标鱼类病原微生物嗜水气单胞菌特异性DNA序列16SribosomalRNA设计的16SrRNA-H1及16SrRNA-H2一对发夹引物、荧光基团、猝灭基团、DNA储存液（1X）、CaCl2溶液，其特征在于，所述目标鱼类病原微生物嗜水气单胞菌测定的特异性DNA序列16SrRNA为：AGAGTTTGATCCTGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGGCAGCGGGAAAGTAGCTTGCTACTTTTGCCGGCGAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCCTGGGAAATTGCCCAGTCGAGGGGGATAACAGTTGGAAACGACTGCTAATACCGCATACGCCCTACGGGGGAAAGCAGGGGACCTTCGGGCCTTGCGCGATTGGATATGCCCAGGTGGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGGGAAACCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCACTTTCAGCGAGGAGGAAAGGTTGATGCCTAATACGTATCAACTGTGACGTTACTCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTGGATAAGTTAGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAATTGCATTTAAAACTGTCCAGCTAGAGTCTTGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACAAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGATTTGGAGGCTGTGTCCTTGAGACGTGGCTTCCGGAGCTAACGCGTTAAATCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGCCTTGACATGTCTGGAATCCTGCAGAGATGCGGGAGTGCCTTCGGGAATCAGAACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTGTCCTTTGTTGCCAGCACGTAATGGTGGGAACTCAAGGGAGACTGCCGGTGATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGCGTACAGAGGGCTGCAAGCTAGCGATAGTGAGCGAATCCCAAAAAGCGCGTCGTAGTCCGGATCGGAGTCTGCAACTCGACTCCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCAAATCAGAATGTTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCACCAGAAGTAGATAGCTTAACCTTCGGGAGGGCGTTTACCACGGTGTGATTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAACCCTAGGGGAACCTGGGGCTGGATCACCCTCCTTTCTA所述引物16SrRNA-H1序列为：TTGATACGTATTAGGCATCAACCTTTCCCAATACACAAAGGTTGATGCCTAA；所述引物16SrRNA-H2序列为：AAAGGTTGATGCCTAATACGTATCAATTAGGCATCAACCTTTGTGTATTGGG。

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百度查询： 湖南科技大学 基于杂交链式反应（HCR）的鱼类病原微生物嗜水气单胞菌16SrRNA基因检测试剂盒及其应用