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申请/专利权人：广东龄值生物科技有限公司

摘要：本发明提出了一种含iNKT细胞的纳米微球及其制备方法，属于医药技术领域，制备方法包括以下步骤：S1.外周血单个核细胞的制备；S2.培养基的制备；S3.细胞培养；S4.包埋改性；S5.磁性沉积。本发明制得的磁性含iNKT细胞的纳米微球能在外加磁场作用下，使药物定向移动到病变部位，同时控制靶向药物释放的药物载体，具有高效低毒的特点，微球中iNKT细胞的含量高，具有很好的抗肿瘤、抗炎等效果，且毒副作用小，质量效果好，能够靶向释药，具有广阔的应用前景。

主权项：1.一种含iNKT细胞的纳米微球的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：S1.外周血单个核细胞的制备：取外周血，肝素抗凝，采用使用淋巴细胞分离培养基分离获得外周血单个核细胞，用磷酸盐缓冲溶液洗涤，3000-5000rmin离心15-20min，获得外周血人单个核细胞；S2.培养基的制备：向KBM581培养基中加入15-20μgmL的α-半乳糖神经酰胺和500-1200UmL的干扰素-γ，搅拌混合均匀，得到培养基；S3.细胞培养：将步骤S1中外周血人单个核细胞加入步骤S2中培养基中，密度调整为2×106mL并混合均匀，36-38℃和3-7vv%CO2的恒温箱中孵育培养15-17天后收集细胞液；S4.包埋改性：向100重量份步骤S3中的细胞液中加入12-15重量份海藻酸钠和1-2重量份卵磷脂，搅拌混合均匀，快速膜乳化，滴加10重量份3-5wt%氯化钙溶液，常温固化20-30min，制得包埋iNKT细胞的微球，将10-15重量份包埋iNKT细胞的微加入100重量份水中，加入17-20重量份多巴胺盐酸盐和1-2重量份催化剂，加热至45-50℃，搅拌反应2-4h，制得改性包埋微球；所述催化剂为pH=8.5-9的Tris-HCl溶液；S5.磁性沉积：将25-30重量份步骤S4制得的改性包埋微球加入100重量份水中，加入16-16.4重量份氯化铁和12.5-12.7重量份氯化亚铁，滴加5-7重量份22-25wt%氨水，氮气保护下，加热至60-70℃，搅拌反应2-4h，3000-5000rmin离心15-20min，洗涤，干燥，制得含iNKT细胞的纳米微球。

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