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申请/专利权人：南京大学

摘要：本发明属于生物技术领域的蛋白质复性方法，针对核受体蛋白的结构特性，以锌离子辅助的梯度透析复性方法，实现对全长核受体蛋白的完全复性，恢复其生物学活性。本发明根据核受体蛋白复性过程中的不同状态，优化透析复性液的组分梯度，使得在不同的复性阶段，以较合适的盐离子强度，稳定剂及中间态抑制剂浓度帮助核受体蛋白进行折叠。此外，针对核受体蛋白DNA结合区DNAbindingdomain，DBD高疏水性的结构特点，引入10μM的硫酸锌，帮助复性过程中DBD区域形成正确的锌指结构，减小因热力学不稳定而导致的蛋白质折叠失败。相比以往的针对核受体蛋白的复性方法，该种方法可实现全长蛋白质非蛋白截短体的完全复性，操作方法简单，得率可达30％以上。复性获得的核受体蛋白具备天然活性，可用于后续生物学功能分析及结构生物学相关应用。

主权项：1.一种锌离子辅助的核受体蛋白体外透析复性方法，其特征在于包括以下步骤：1通过原核表达的方式，表达携带His标签的核受体蛋白PPARγ；2菌体破碎裂解后，收集包涵体，通过2M-4M尿素梯度清洗，除去大部分的杂蛋白；3使用8M尿素溶解最终包涵体组分，置于透析袋中，进行锌离子辅助的梯度透析复性；所述透析复性为依次用RenaturationBuffer1和RenaturationBuffer2～8进行透析复性；其中，RenaturationBuffer1-8如下表所示： TrisBase NaCl Urea Arginine Glycerol ZnSO4·7H2O DTT Buffer1 50mM 150mM 4M - - 10uM 1mM Buffer2 50mM 150mM 2M 0.5M - 10μM 1mM Buffer3 50mM 150mM 1M 0.5M - 10μM 1mM Buffer4 50mM 150mM - 0.5M 10％ 10μM 1mM Buffer5 50mM 150mM - 0.25M 10％ 10μM 1mM Buffer6 50mM 150mM - 0.1M 10％ 10μM 1mM Buffer7 50mM 150mM - - 10％ 10μM 1mM Buffer8 50mM 150mM - - - 10μM 1mM 4使用超滤技术对透析复性完成后的蛋白液进行浓缩；5镍柱纯化目的蛋白，透析除去咪唑，保存于storagebuffer中；6对复性纯化后核受体蛋白进行生物学活性的评估与测定。

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百度查询： 南京大学 一种核受体蛋白体外液相透析复性的方法