买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：郑州大学第三附属医院(河南省妇幼保健院)

摘要：本发明公开了一种基于扩增子测序检测FH基因突变的文库构建方法，属于基因测序技术领域；包括以下步骤：先使用针对FH基因序列特异修饰引物对靶DNA进行PCR扩增富集，使扩增产物带上特异性与接头扩增引物相结合的序列，得到第一轮PCR产物；使用磁珠纯化第一轮PCR产物，得到富集PCR纯化产物；再使用接头扩增引物对富集PCR纯化产物进行扩增并加上测序接头，包括Ill‑iXX‑P5序列，Ill‑iXX‑P7序列和标签序列Index，完成测序文库的构建；将文库用于下一步高通量测序仪器进行检测，得到目标序列信息。本发明结合优化的PCR反应程序和高保真Taq酶的使用，在普通PCR平台上实现对样品核酸中目标序列进行用于高通量测序使用的文库构建，以实现对多基因多靶点突变进行准确、快速检测。

主权项：1.一种基于扩增子测序检测FH基因突变的文库构建方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、先使用由针对FH基因序列特异修饰引物的引物MIX配制的PCR富集反应液，以子宫平滑肌瘤DNA样本为模板，进行目标基因序列的扩增富集，使扩增产物带上特异性与接头扩增引物相结合的序列，得到第一轮PCR产物；其中，引物MIX由序列如SEQIDNO.1-32所示的序列集和pH＝8.0的TE配制而成；PCR富集反应液由RingCapbuffer、MgCl2、dNTPs、引物MIX、H2O、Taq酶和DNA配制而成；S2、使用磁珠纯化第一轮PCR产物，得到富集PCR纯化产物；S3、使用带有测序接头序列和标签序列Index接头扩增引物配制测序接头连接反应液，对富集PCR纯化产物进行二轮PCR扩增，并在二轮PCR扩增中完成测序接头的添加和文库的扩增；其中，带有测序接头序列和标签序列Index接头扩增引物的序列如SEQIDNO.33-34所示，即Ill-iXX-P5和Ill-iXX-P7序列；测序接头连接反应液由RingCapbuffer、MgCl2、dNTPs、Ill-iXX-P7、Ill-iXX-P5、H2O、RingCap-Taq酶和富集PCR纯化产物配制而成；S4、二轮PCR扩增产物采用磁珠纯化后，得到样本的文库；S5、将文库用于下一步高通量测序仪器进行检测，得到目标序列信息，即fastq文件；fastq文件经生物信息学分析处理，进行数据质控、序列比对、突变注释和拷贝数分析。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 郑州大学第三附属医院(河南省妇幼保健院) 一种基于扩增子测序检测FH基因突变的文库构建方法