申请/专利权人：上海海洋大学

申请日：2024-01-29

公开（公告）日：2024-05-03

公开（公告）号：CN117965462A

主分类号：C12N7/02

分类号：C12N7/02;C12Q1/02;C12Q1/70;C12R1/93

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.21#实质审查的生效;2024.05.03#公开

摘要：本发明公开了一种养殖水环境中II型鲤疱疹病毒的富集检测方法，该富集检测方法包括：建立基于Fe3+絮凝法高效富集养殖水中Ⅱ型鲤疱疹病毒的富集体系，包括FeCl3溶液和洗脱液配制；采集养殖水体，经UV预处理后人工添加Ⅱ型鲤疱疹病毒置于恒温磁力搅拌，添加FeCl3溶液至水样中Fe3+终浓度为1mg.L‑1，恒温磁力搅拌，养殖水体经过滤膜过滤；对截留有Fe‑Ⅱ型鲤疱疹病毒絮凝物的过滤膜进行洗脱，洗脱液分离，提取其中病毒DNA检测。本发明基于Fe3+絮凝法结合滤膜过滤用于养殖水环境中Ⅱ型鲤疱疹病毒的富集检测，可实现对水产养殖对象Ⅱ型鲤疱疹病毒的无损化取样检测。

主权项：1.一种基于Fe3+絮凝法高效富集养殖水中Ⅱ型鲤疱疹病毒的富集体系，其特征在于，包括FeCl3溶液和洗脱液，所述洗脱液选自柠檬酸-EDTA洗脱液、苹果酸-EDTA洗脱液、1×TE-抗坏血酸洗脱液、1×TE-柠檬酸洗脱液、1×TE-苹果酸洗脱液中的一种或多种；其中：所述FeCl3溶液的配制方法包括：称取4.83gFeCl3·6H2O溶解于100mL去离子水中形成酸性的FeCl3溶液；和或所述柠檬酸-EDTA洗脱液的配制方法包括：称取0.755g0.125MTris-base、1.86g0.1MEDTA·2Na、2.04g0.2MMgCl2·6H2O、3.68g0.2M柠檬酸钠，上述试剂依次溶解于去离子水中，调节pH至6.0～6.5之间，定容至50mL；和或所述苹果酸-EDTA洗脱液的配制方法包括：称取0.755g0.125MTris-base、1.86g0.1MEDTA·2Na、2.04g0.2MMgCl2·6H2O，上述试剂依次溶解于去离子水中，用5N氢氧化钠溶液调节pH至6.5，再加入1.68g0.2MDL-苹果酸C6H8O6溶解，并用5N氢氧化钠调节pH至6.0～6.5之间，定容至50mL；和或所述1×TE-抗坏血酸洗脱液的配制方法包括：称取1.76g0.2ML-抗坏血酸C6H8O6，溶解于40mL1×TEBuffer中，并用5N氢氧化钠调节pH至6.0～6.5之间，定容至50mL；和或所述1×TE-柠檬酸洗脱液的配制方法包括：称取3.68g0.2ML-抗坏血酸C6H8O6溶解于40mL1×TEBuffer中，调节pH至6.0～6.5之间，定容至50mL；和或所述1×TE-苹果酸洗脱液的配制方法包括：称取1.68g0.2ML-抗坏血酸C6H8O6溶解于40mL1×TEBuffer中，并用5N氢氧化钠调节pH至6.0～6.5之间，定容至50mL。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海海洋大学 一种养殖水环境中II型鲤疱疹病毒的富集检测方法

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