申请/专利权人：中国检验检疫科学研究院

申请日：2022-06-01

公开（公告）日：2024-05-03

公开（公告）号：CN115015460B

主分类号：G01N30/88

分类号：G01N30/88

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.03#授权;2022.09.23#实质审查的生效;2022.09.06#公开

摘要：本发明涉及一种利用广泛靶向代谢组学技术鉴别冬虫夏草产地的方法，该方法包括：1对不同产地的冬虫夏草样品进行定性定量分析；2对不同产地冬虫夏草进行代谢组学比较，筛选出差异显著性代谢成分；3对差异显著代谢成分进行可视化分析。该发明的方法对于冬虫夏草的产地研究具有重要理论参考意义，也为其他物种的产地鉴别及溯源提供了技术支持。

主权项：1.一种运用广泛靶向代谢组学技术鉴定冬虫夏草产地的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）冬虫夏草样品及QC样品的制备：收集不同产地冬虫夏草样品，经有机溶剂提取后得到待测液；QC样品是通过混合所有样品的等分试样制备的一个汇集样品；（2）冬虫夏草样品的检测分析：采用超高效液相色谱和串联质谱仪在多反应监测模式下采集质谱数据，在获得不同样本的代谢物质谱数据后，通过MultiQuant软件对不同样品中同一代谢物的质谱峰进行积分和校正，以保证定性和定量的准确性；（3）冬虫夏草样品的定性定量分析：将质谱数据与迈维生物技术有限公司自建的数据库MWDB进行比对，鉴定样品中的代谢成分，基于三重四极杆质谱的多反应监测模式进行定量分析；（4）代谢组学数据的处理与分析：采用多元统计分析法进行数据分析，首先采用无监督模式的主成分（PCA）分析对检测到的代谢成分进行分析，初步了解组间的整体代谢差异和组内样本之间的变异度大小，然后通过有监督模式的正交偏最小二乘判别（OPLS-DA）分析法预测所建立模型的预测能力和可靠性；（5）基于OPLS-DA结果，根据获得的多变量分析OPLS-DA模型的变量重要性投影（VIP）值，初步筛选出不同产地间差异的代谢成分；并利用提高VIP阈值和P值进一步筛选出差异显著的代谢成分；（6）通过小提琴图对代谢产物进行可视化分析；所述步骤（1）中收集青海、西藏、云南、四川和尼泊尔5个产地的冬虫夏草样品，冻干后用研磨仪在研磨至粉末状；准确称取不同产地粉末，用20%甲醇水溶液提取；提取液离心，合并上清液，经0.22µm微孔滤膜过滤后稀释；取等体积的水和上清液加入离心管中，离心，收集上清液于进样瓶中，待分析；所述步骤（2）中UPLC-QTRAP的液相色谱条件为：色谱柱：WatersACQUITYUPLCHSST3C18；流动相：A相为0.1%甲酸水，B相为0.1%甲酸乙腈；梯度洗脱：0-11min，5%-90%B；11-12min，90%B；12-12.1min，90%-5%B；12.1-14min，5%B；柱温40℃；流速0.35mLmin；进样量2µL；所述步骤（2）中UPLC-QTRAP的液相色谱条件为：步骤（2）中UPLC-QTRAP的质谱条件：电喷雾离子源温500℃，正负离子模式下的质谱电压分别为5500V和-4500V，离子源气体I50psi，气体II50psi，气帘气25psi，碰撞诱导电离参数设置为高；在三重四极杆中，每个离子对是根据优化的去簇电压和碰撞能进行扫描检测。

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