申请/专利权人：杭州市食品药品检验研究院(杭州市食品药品审核查验服务中心、杭州市药品与医疗器械不良反应监测中心)

申请日：2022-09-16

公开（公告）日：2024-05-03

公开（公告）号：CN115452990B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/74;G01N30/86

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.03#授权;2022.12.27#实质审查的生效;2022.12.09#公开

摘要：本发明涉及食品药品中真菌毒素的检测方法，尤其涉及一种免疫亲和柱净化‑柱后光化学衍生‑高效液相色谱法同时检测六神曲中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的方法。该方法用XBridge®Phenyl柱子以乙腈为流动相A，0.2%醋酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流速:1mLmin，柱温:35℃；可变荧光检测波长:0～20min,激发波长365nm,发射波长450nm（检测黄曲霉毒素G2,G1,B2,B1）；20.01～25min,激发波长274nm,发射波长460nm检测玉米赤霉烯酮）；25.01～25min,激发波长333nm,发射波长460nm检测赭曲霉毒素A）。该方法简便、快速、净化效果好,各项技术指标均符合真菌毒素检测的求,可以满足1次进样可同时测定六神曲中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的限量检测要求。

主权项：1.一种同时检测六神曲中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的方法，黄曲霉毒素为黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2；其特征在于，该方法包括以下的步骤：1）样品提取精密称定供试品5g，精密加入80%体积百分比浓度甲醇50ml，超声40min，转移至50ml离心管中，6000转离心10min；精密量取上清液10ml置50ml量瓶中用水稀释至刻度，摇匀，6000转离心10min，量取上清液25ml通过免疫亲和柱进行洗脱，洗脱完成后加入20ml水进行再次洗脱，弃去洗脱液，将柱子中的水挤出，再加2ml的甲醇洗脱，收集洗脱液，摇匀；2）高效液相色谱法测定测定设备采用岛津高效液相色谱仪和德国LC-Tech公司生产光化学衍生仪，用XBridge®Phenyl苯基柱以乙腈为流动相A，0.1%体积百分比浓度醋酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流速:1mLmin，柱温:35℃；梯度洗脱如下： 时间min 乙腈vv 0.1%醋酸溶液vv 0.0-10.0 30 70 10.0-25.0 30→70 70→30 25.0-30.0 70 30 30.0-30.01 70→30 30→70 30.01-38.0 30 70 检测黄曲霉毒素G2，G1，B2，B1：0～20min,激发波长365nm,发射波长为450nm；检测玉米赤霉烯酮：20.01～25min,激发波长274nm,发射波长460nm；检测赭曲霉毒素A：25.01～25min,激发波长333nm,发射波长460nm；该方法还包括以下的步骤：精密量取对照品适量，加甲醇稀释得到，对照品进样量为2、5、10、15、20μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以各对照品浓度X，μg·mL为横坐标，峰面积Y为纵坐标，各成分回归方程如下： 成分 回归方程 r^2 G2 y=2361.2x+31.366 0.9999 G1 y=777.22x-30.634 0.9999 B2 y=3239.5x+106.73 0.9998 B1 y=959.6x+31.829 0.9991 玉米赤霉烯酮 y=14109x+77.512 0.9992 赭曲霉毒素A y=223.58x-70.38 0.9995 该方法还包括以下的步骤：取对照品混标溶液一份，分别于0、4h、8h、12h、16h、20h、24h进样,进样量为20μl，分别测定G2,G1,B2,B1,玉米赤霉烯酮，赭曲霉毒素A的峰面积值并计算RSD，结果如下： 成分 RSD% G2 1.48 G1 0.85 B2 1.82 B1 2.38 玉米赤霉烯酮 3.19 赭曲霉毒素A 1.24 该方法还包括以下的步骤：取六神曲粉末5.0g，共3份，精密称定，分别置500mL具塞锥形瓶中，分别加入黄曲霉毒素对照品储备液0.8ml、玉米赤霉烯酮对照品储备液1ml、赭曲霉毒素对照品0.2ml所述的方法操作，进样10μL测定，计算回收率，结果G2,G1,B2,B1,玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A的平均加样回收率n=6分别为：99.88%、99.10%、96.58%、83.49%、69.31%、33.14%，RSD分别为1.75%、1.17%、1.06%、1.74%、9.98%、12.73%。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 杭州市食品药品检验研究院(杭州市食品药品审核查验服务中心、杭州市药品与医疗器械不良反应监测中心) 一种检测六神曲中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的方法

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