申请/专利权人：西北大学

申请日：2022-06-09

公开（公告）日：2024-05-28

公开（公告）号：CN115165995B

主分类号：G01N27/327

分类号：G01N27/327;G01N27/48;G01N1/44;G01N1/28

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.28#授权;2022.10.28#实质审查的生效;2022.10.11#公开

摘要：本发明公开了一种赭曲霉素A的检测方法和电化学OTA适体传感器的制备方法，该检测方法采用电化学OTA适体传感器检测赭曲霉素A。该电化学OTA适体传感器的制备方法包括：将ZnO‑Au粉末、全氟磺酸型聚合物、OTA适体互补DNA、OTA适体和亚甲蓝依次地修饰在预处理玻碳工作电极上，制得传感电极；再以该传感电极作为工作电极，以银氯化银电极作为参比电极，以铂丝电极作为对电极，制得电化学OTA适体传感器。本发明的赭曲霉素A的检测方法，利用传感界面上的OTA适体与赭曲霉素A的特异性结合，实现了对待检测样品溶液中赭曲霉素A的快速检测。该检测方法的灵敏度极高，且准确度高。

主权项：1.一种赭曲霉素A的检测方法，其特征在于，采用电化学OTA适体传感器检测赭曲霉素A；所述的电化学OTA适体传感器的制备方法包括：将ZnO-Au粉末、全氟磺酸型聚合物、OTA适体互补DNA、OTA适体和亚甲蓝依次地修饰在预处理玻碳工作电极上，制得传感电极；再以所述的传感电极作为工作电极，以银氯化银电极作为参比电极，以铂丝电极作为对电极，制得电化学OTA适体传感器；该检测方法具体包括如下步骤：步骤一，制备电化学OTA适体传感器：步骤1.1，制备ZnO-Au粉末：步骤1.1.1，制备ZnO粉末；将ZnNO32·6H2O水溶液逐滴加入到KOH水溶液中，制得溶液A；将溶液A在30℃下保持8～14h后，进行离心，离心过程中用乙醇多次洗涤，离心结束后弃去上清，获得沉淀B，沉淀B经干燥后，制得ZnO粉末；所述的溶液A中ZnNO32·6H2O与KOH的摩尔量之比为1:8；步骤1.1.2，制备纳米Au溶液；将HAuCl4·4H2O溶液和甲醇加入水中，制得混合溶液C，在搅拌状态下，采用NaOH溶液将混合溶液C的pH调至7.2～7.5，制得纳米Au溶液；步骤1.1.3，制得ZnO-Au粉末；将步骤1.1.1制得的ZnO粉末加入到步骤1.1.2制得的纳米Au溶液中，搅拌0.5～2h后，制得混合溶液D；将混合溶液D在110～130℃下保温0.5～2h，冷却至室温后，离心收集样品，离心过程中用超纯水和乙醇洗涤，离心结束后进行干燥，制得ZnO-Au粉末；所述的混合溶液D中Au与Zn的摩尔量之比为（1:6）～（1:5）；步骤1.2，对玻碳电极进行预处理；将抛光后的玻碳电极浸入乙醇和水溶液中进行超声清洗，超声清洗结束后，用氮气吹干，制得预处理玻碳工作电极；步骤1.3，进行ZnO-Au的修饰；将步骤1.1制得的ZnO-Au粉末均匀分散于水中，得到悬浮液E，将悬浮液E滴在步骤二制得的预处理玻碳工作电极上，室温下晾干后，制得ZnO-Au改性电极；步骤1.4，进行全氟磺酸型聚合物的修饰；将全氟磺酸型聚合物溶液滴在步骤1.3制得的ZnO-Au改性电极上，室温下晾干后，制得nafion-ZnO-Au改性电极；步骤1.5，进行适体的修饰；步骤1.5.1，对OTA适体互补DNA和OTA适体进行预处理；将OTA适体互补DNA和OTA适体在94～98℃加热3～10min后，再迅速冷却3～10min，制得单链的OTA适体互补DNA和单链的OTA适体；所述的OTA适体互补DNA和OTA适体的摩尔量之比为1:1；步骤1.5.2，进行OTA适体互补DNA的修饰；将步骤1.5.1制得的单链的OTA适体互补DNA滴在步骤1.4制得的nafion-ZnO-Au改性电极上，室温下过夜后清洗，然后将改性电极在6-巯基己醇中孵育1～3h，孵育结束后清洗，制得nafion-ZnO-Au-cDNA改性电极；步骤1.5.3，进行OTA适体的修饰；将步骤1.5.1制得的单链的OTA适体，滴加在步骤1.5.2制得的nafion-ZnO-Au-cDNA改性电极上后，静置1～3h，静置结束后清洗，然后将改性电极于亚甲蓝溶液中孵育30～60min后，清洗并晾干后，制得传感电极；再以所述的传感电极作为工作电极，以银氯化银电极作为参比电极，以铂丝电极作为对电极，制得电化学OTA适体传感器；步骤二，获得峰电流增量与赭曲霉素A的质量浓度的关系式；配制多个赭曲霉素A标准溶液，将步骤一制得的传感电极浸泡于赭曲霉素A标准溶液中，在室温下孵育10～60min后清洗，然后将传感电极浸泡于Tris-HCl缓冲溶液中，采用微分脉冲伏安法进行测定，获得赭曲霉素A的质量浓度与微分脉冲伏安法测定电流之间的关系曲线；所述的赭曲霉素A标准溶液的质量浓度范围为0～50000pg•mL-1；所述的赭曲霉素A的质量浓度与微分脉冲伏安法测定电流之间的关系曲线，经线性拟合后，获得峰电流增量与赭曲霉素A的质量浓度的关系式，如式I所示：ΔI=-0.2275×lgCOTA-1.0745式I；式中：ΔI表示赭曲霉素A标准溶液孵育电极前后亚甲蓝的峰电流增量，单位为μA；lgCOTA表示赭曲霉素A标准溶液中赭曲霉素A的质量浓度，单位为pg•mL-1；步骤三，制备待检测样品溶液；步骤3.1，制备固体待检测样品溶液；在固体待检测样品中依次加入浓硝酸和过氧化氢，进行消解，消解完毕后进行定容，制得固体待检测样品溶液；步骤3.2，制备液体待检测样品溶液；将液体待检测样品在4°C下放置25～60min，然后取出并离心，将离心所得的上清液进行氮气脱气处理，制得液体待检测样品溶液；步骤四，进行检测；先将步骤三制得的待检测样品溶液稀释10倍，然后将步骤二制得的电化学OTA适体传感电极浸泡在稀释后的待检测样品溶液中，静置10～30min后，采用微分脉冲伏安法进行检测，获得电极在待检测样品溶液中的亚甲蓝峰电流增量；将峰电流增量代入步骤二中的式I中，获得待检测样品溶液的赭曲霉素A的质量浓度；所述的赭曲霉素A的检测方法的检出范围为0.1～30000pg·mL-1，检出限为0.05pg·mL-1，相对标准偏差为2.7%～4.6%。

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