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申请/专利权人：西北农林科技大学
申请日：2023-03-02
公开（公告）日：2024-05-14
公开（公告）号：CN116497099B
主分类号：C12Q1/6858
分类号：C12Q1/6858;C12N15/11
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.05.14#授权;2023.08.15#实质审查的生效;2023.07.28#公开
摘要：本发明涉及分子生物技术领域，具体公开了一种苹果黄蚜钠离子通道L1014F突变位点的LAMP检测引物及方法，所述引物包括正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP和环状引物LooPB。本发明提供的检测苹果黄蚜钠离子通道L1014F突变位点的方法，灵敏度高、检测范围大，结果准确可靠，扩增效果好，检测结果准确可靠，适用于苹果黄蚜的快速检测。
主权项：1.一种检测苹果黄蚜钠离子通道L1014F突变位点的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1，提取苹果黄蚜基因组DNA；S2，以S1提取的基因组DNA为模板，以正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP和环状引物LooPB为检测引物进行PCR扩增；所述正向外引物F3的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述反向外引物B3的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述正向内引物FIP的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述反向内引物BIP的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；所述环状引物LooPB的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示；PCR扩增体系为：外引物F3和B3各10μM、内引物FIP和BIP各40μM，内外引物混合一共加入7μL，外引物F3、B3与内引物FIP、BIP的体积比为8∶1，外引物F3与外引物B3、内引物FIP与内引物BIP的体积比均为1∶1，10×LAMPPCR等温扩增反应混合液2.5μL，8UBst聚合酶1μL，DNA模板1.0μL，2μL250μMHNB显色剂；扩增反应的反应条件为：65℃反应70min；S3，结果判断：利用荧光染料显色法将S2的扩增产物中加入染料，放在白纸上进行颜色观察，试管出现蓝色，电泳出现梯形条带，表明存在钠离子通道位点突变，若反应体系变为紫色，无条带扩增，表明待测样品中无钠离子通道L1014F突变。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 西北农林科技大学 一种苹果黄蚜钠离子通道L1014F突变位点的LAMP检测引物及方法
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