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选择性敲除肿瘤相关成纤维细胞内Atg5分子的动物模型的构建方法及应用 

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申请/专利权人:浙江大学医学院附属第一医院(浙江省第一医院)

摘要:本发明公开了一种选择性敲除肿瘤相关成纤维细胞内Atg5分子的动物模型的构建方法及应用,包括Atg5‑floxed动物模型构建、Acta2‑CreERT2动物模型构建以及杂交小鼠的繁殖三个步骤。本发明成功构建了缺乏Atg5分子的模式动物,该模型体内不能正常表达Atg5蛋白,可用于Atg5蛋白的功能研究,如在肿瘤微环境尤其是CAFs中的作用。该动物模型的建立和应用,将有助于深入理解CAFs自噬在肿瘤中的作用,特别是ATG5如何调控CAFs的功能,及其作为潜在治疗靶点的重要性。

主权项:1.一种选择性敲除肿瘤相关成纤维细胞内Atg5分子的动物模型的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:A、Atg5-floxed动物模型构建基于确保Cre介导的重组能有效导致Atg5基因失活的原则,在Atg5基因的关键编码调控区设计并插入两个loxP位点;在动物胚胎干细胞中将修改后的Atg5基因导入实验动物基因组,筛选后生成Atg5-floxed动物模型;B、Acta2-CreERT2动物模型构建以与步骤A同样品系的实验动物为背景,选择Acta2基因作为肿瘤相关成纤维细胞CAFs特异性表达的标志,用以驱动Cre重组酶的表达;通过Acta2启动子确保Cre重组酶仅在CAFs中表达,从而实现特异性的基因敲除,进而构建得到Acta2-CreERT2动物模型;C、杂交小鼠的繁殖将带有Atg5-floxed动物与Acta2-CreERT2动物杂交,并进行Acat2以及Atg5基因鉴定,筛选得到敲除CAFs中内Atg5分子的动物模型。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 浙江大学医学院附属第一医院(浙江省第一医院) 选择性敲除肿瘤相关成纤维细胞内Atg5分子的动物模型的构建方法及应用

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