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申请/专利权人：浙江大学医学院附属第一医院(浙江省第一医院)
申请日：2024-01-22
公开（公告）日：2024-05-24
公开（公告）号：CN118064499A
主分类号：C12N15/85
分类号：C12N15/85;C12N15/12;C12N9/90;A01K67/0276;A61K49/00
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.06.11#实质审查的生效;2024.05.24#公开
摘要：本发明公开了一种选择性敲除肿瘤相关成纤维细胞内Atg5分子的动物模型的构建方法及应用，包括Atg5‑floxed动物模型构建、Acta2‑CreERT2动物模型构建以及杂交小鼠的繁殖三个步骤。本发明成功构建了缺乏Atg5分子的模式动物，该模型体内不能正常表达Atg5蛋白，可用于Atg5蛋白的功能研究，如在肿瘤微环境尤其是CAFs中的作用。该动物模型的建立和应用，将有助于深入理解CAFs自噬在肿瘤中的作用，特别是ATG5如何调控CAFs的功能，及其作为潜在治疗靶点的重要性。
主权项：1.一种选择性敲除肿瘤相关成纤维细胞内Atg5分子的动物模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：A、Atg5-floxed动物模型构建基于确保Cre介导的重组能有效导致Atg5基因失活的原则，在Atg5基因的关键编码调控区设计并插入两个loxP位点；在动物胚胎干细胞中将修改后的Atg5基因导入实验动物基因组，筛选后生成Atg5-floxed动物模型；B、Acta2-CreERT2动物模型构建以与步骤A同样品系的实验动物为背景，选择Acta2基因作为肿瘤相关成纤维细胞CAFs特异性表达的标志，用以驱动Cre重组酶的表达；通过Acta2启动子确保Cre重组酶仅在CAFs中表达，从而实现特异性的基因敲除，进而构建得到Acta2-CreERT2动物模型；C、杂交小鼠的繁殖将带有Atg5-floxed动物与Acta2-CreERT2动物杂交，并进行Acat2以及Atg5基因鉴定，筛选得到敲除CAFs中内Atg5分子的动物模型。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江大学医学院附属第一医院(浙江省第一医院) 选择性敲除肿瘤相关成纤维细胞内Atg5分子的动物模型的构建方法及应用
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