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申请/专利权人：中国海洋大学
申请日：2024-02-01
公开（公告）日：2024-05-31
公开（公告）号：CN118109388A
主分类号：C12N5/071
分类号：C12N5/071;A61K39/39;A61P37/04
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.06.18#实质审查的生效;2024.05.31#公开
摘要：本发明公开了一种富含抗原递呈分子MHCII阳性外泌体的制备方法，属于生物技术领域。本发明的方法包括如下步骤：鳗弧菌摇至对数生长期后将其灭活；取灭活的鳗弧菌溶液对鱼类进行腹腔注射，诱导6‑24h；将鱼类麻醉后，用注射器沿尾静脉抽取外周血；去除外周血后，用注射器向鱼类腹腔中注射无血清L15培养基；按摩鱼腹后，使用注射器沿腹腔上沿抽出腹腔液；最后采用连续梯度离心方法分离腹腔液得到MHCII阳性外泌体。本发明制备的富含抗原递呈分子MHCII阳性的外泌体在促进T细胞活化及疫苗免疫效力方面具有显著的作用。本发明通过适用于鱼类的刺激物和独特的鱼类腹腔灌洗方法创造性地建立了一种高效、高纯度和高得率的鱼类富含抗原递呈分子MHCII阳性外泌体的制备方法，具有重要的科学意义和应用价值。
主权项：1.一种富含鱼类抗原递呈分子MHCII阳性外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：将鳗弧菌摇至对数生长期后将其灭活；步骤二：取灭活的鳗弧菌溶液对鱼类进行腹腔注射，诱导6-24h；步骤三：将鱼类麻醉后，用注射器沿尾静脉抽取外周血；去除外周血后，用注射器向鱼类腹腔中注射无血清L15培养基；步骤四：按摩鱼腹后，使用注射器沿腹腔上沿抽出腹腔液；步骤五：采用连续梯度离心方法分离外泌体：在4oC下，对抽取的腹腔液，先后分别500×g离心10min，4000×g离心30min，以去除细胞和细胞碎片得到上清；细胞上清10000×g离心30min以去除鱼类腹腔大囊泡，细胞上清继续在115000×g离心90min得到沉淀；用磷酸盐缓冲液重悬沉淀后再在115000×g离心90min，去除含脂质体的上清，最后将沉淀重悬于磷酸盐缓冲液中，即分离得到富含鱼类抗原递呈分子MHCII的阳性外泌体。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国海洋大学 一种富含鱼类抗原递呈分子MHCII阳性外泌体的制备方法
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