申请/专利权人：南京溯远基因科技有限公司

申请日：2024-01-29

公开（公告）日：2024-06-04

公开（公告）号：CN118127139A

主分类号：C12Q1/6869

分类号：C12Q1/6869

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.06.21#实质审查的生效;2024.06.04#公开

摘要：一种基于Sanger测序的新冠全读长检测方法及其应用，检测方法包括以下步骤（1）以新冠病毒RNA病毒为材料，提取RNA病毒；（2）对RNA病毒进行逆转录及PCR扩增；（3）对（2）的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测；（4）对（2）的PCR扩增产物进行纯化，并测定纯度；（5）对（4）的PCR纯化产物进行测序PCR扩增；（6）对（5）的测序PCR扩增产物进行纯化；（7）对（6）的测序PCR纯化产物毛细管电泳的Sanger测序，上机电泳、测序、数据分析以及数据拼接。本发明解决目前新型冠状病毒基因组二代测序准确度较低、流程时间较长，不利于基因组数据获取以及生物信息学分析难度较大的问题。

主权项：1.一种基于Sanger测序的新冠全读长检测方法，其特征在于，使用毛细管电泳技术对新冠病毒进行快速检测，检测方法的具体过程如下：（1）以新冠病毒RNA病毒为材料，利用RNA提取试剂盒提取RNA病毒；（2）逆转录及PCR扩增：RNA病毒利用逆转录+PCR扩增一步法试剂盒进行逆转录及PCR扩增，得到PCR扩增产物；逆转录+PCR扩增的扩增体系为25μL扩增体系；逆转录+PCR扩增的扩增程序：50℃逆转录30min，94℃预变性2min，94℃变性30s，55-60℃退火30s，72℃延伸90s，共30个循环；4℃低温保存；（3）DNA质量评估：对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，条带应单一清晰；（4）PCR扩增产物纯化：PCR扩增产物再利用PCR产物纯化试剂盒进行纯化，并利用分光光度计测定脱氧核糖核酸纯度，纯度OD值应为1.8~2，脱氧核糖核酸的浓度≥10ngμL，得到PCR纯化产物；（5）测序PCR扩增：将PCR纯化产物利用BigdyeTerminatorv3.1CycleSequencing测序反应试剂盒进行PCR扩增，得到测序PCR扩增产物；测序PCR扩增的扩增体系为10μL扩增体系；测序PCR扩增的扩增程序：96℃预变性1min，96℃变性10s，50℃退火5s，60℃延伸4min，共40个循环；4℃低温保存；（6）测序PCR扩增产物纯化：将0.5MEDTA溶液与3M醋酸钠溶液混合，再对测序PCR扩增产物进行纯化，得到测序PCR纯化产物；（7）毛细管电泳的Sanger测序：将测序PCR纯化产物通过毛细管电泳-一代Sanger测序技术进行上机电泳、测序、数据分析以及数据拼接。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南京溯远基因科技有限公司 一种基于Sanger测序的新冠全读长检测方法及其应用

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