买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：南京迈迪森亚生物科技有限公司

摘要：本发明公开了一种同时定量检测血清中3种急性心肌梗死相关microRNA荧光探针的制备方法：合成金属有机骨架Fe‑MIL‑88；发夹探针H1～H9与Fe‑MIL‑88发生荧光共振能量转移作用，发夹探针上标记的FAMH1‑H3,TAMRAH4‑H6,Cy5H7‑H9的荧光被猝灭，当存在目标物时，520nm处FAM的荧光随着目标物miR‑21浓度增加而增强，580nm处TAMRA的荧光随着目标物miR‑499浓度增加而增强，680nm处Cy5的荧光随着目标物miR‑133a浓度增加而增强；根据相应荧光强度对目标物的浓度进行定量检测。该方法灵敏度高、选择性好、检测简便。

主权项：1.一种同时定量检测血清中3种急性心肌梗死相关microRNA荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤如下：（1）、合成金属有机骨架Fe-MIL-88，其紫外可见吸收波长为400-800nm；所述金属有机骨架Fe-MIL-88的合成步骤如下：将1,4-二羧基苯，六水合氯化铁与N,N-二甲基甲酰胺混合，然后加入乙酸，在120℃下反应4h，离心后获得的产物分别用N,N-二甲基甲酰胺、乙醇和水洗涤；（2）、制备荧光发夹探针H1,H2,H3,H4,H5,H6,H7,H8,H9：将H1-H9于95℃反应，然后自然冷却至室温；其中，所述发夹探针H1-H3标记FAM,所述发夹探针H4-H6标记TAMRA,所述发夹探针H7-H9标记Cy5，其中，H1的序列为：TCGTTTCAACATCAGTCTGATAAGCTATGATCAGATCGTTAGCTTATCAGACTG；H2的序列为：CAGTCTGATAAGCTAACGATCTGATCACTGATGTTGAAATGATCAGATCGTTAG；H3的序列为：CTAACGATCTGATCGTTTCAACATCAGTAGCTTATCAGACTGATGTTGAAACGA；H4的序列为：TAMRA-TCGTTAAACATCACTGCAAGTCTTAAGAATCAGATCGTTTAAGACTTGCAGT；H5的序列为：TAMRA-ACTGCAAGTCTTAAACGATCTGATTCGTGATGTTTAACGAATCAGATCGTTT；H6的序列为：TAMRA-AAACGATCTGATTCGTTAAACATCACTTAAGACTTGCAGTGATGTTTAACGA；H7的序列为：Cy5-TCGTTATTTGGTTCCATTTTACCAGCTCGATCAGATCGTAGCTGGTAAAATGGA；H8的序列为：Cy5-TCCATTTTACCAGCTACGATCTGATCGGGAACCAAATAACGATCAGATCGTAGC；H9的序列为：Cy5-GCTACGATCTGATCGTTATTTGGTTCCAGCTGGTAAAATGGAACCAAATAACGA；所述3种急性心肌梗死相关microRNA为microRNA-21、microRNA-499和microRNA-133a，所述H1-H3用于检测microRNA-21、所述H4-H5用于检测microRNA-499；所述H7-H9用于检测microRNA-133a；（3）、制备荧光淬灭探针：将步骤（2）所得的发夹探针与步骤（1）所得的Fe-MIL-88混合，Fe-MIL-88浓度为175-525μgmL，发夹探针与Fe-MIL-88培育时间为0-40min且大于0，520nm处FAM的荧光随着目标物microRNA-21浓度逐渐增加而逐渐增强，580nm处TAMRA的荧光随着目标物microRNA-499浓度逐渐增加而逐渐增强，680nm处Cy5的荧光随着目标物microRNA-133a浓度逐渐增加而逐渐增强；目标物与发夹探针培育时间为0-120min且大于0；（4）、根据荧光强度对相应目标物的浓度绘制标准曲线；根据520nm处荧光强度对microRNA-21的浓度绘制标准曲线，根据580nm处荧光强度对microRNA-499的浓度绘制标准曲线，根据680nm处荧光强度对microRNA-133a的浓度绘制标准曲线；（5）、根据标准曲线，获得样品中microRNA-21,microRNA-499,microRNA-133a的浓度，完成对3种microRNA的定量检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南京迈迪森亚生物科技有限公司 一种同时定量检测血清中3种急性心肌梗死相关microRNA荧光探针的制备方法