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申请/专利权人：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所
申请日：2024-01-25
公开（公告）日：2024-06-07
公开（公告）号：CN118147055A
主分类号：C12N5/077
分类号：C12N5/077;C12R1/91
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.06.25#实质审查的生效;2024.06.07#公开
摘要：一种黄河鲤肌肉成肌细胞系构建的方法，本发明涉及一种鱼类细胞系构建的方法。本发明方法：一、无菌环境下获取鲤鱼肌肉组织；二、消化肌肉组织；三、细胞悬液制备；四、细胞悬液进行计数；五、采用差速贴壁法对黄河鲤成肌细胞进行纯化，再用胰酶进行细胞消化传代。本发明通过胰酶、胶原酶相结合方法大大提高成肌细胞获取数量，减少组织块贴壁培养消耗时间长、数量不稳定、杂细胞多的缺点；本发明方法所得传代细胞生物学特性稳定且增殖能力强，本发明建立了一种黄河鲤肌肉成肌细胞系的快速构建方法，提高了细胞获取能力，缩短了细胞获取时间，为优质肌肉肉质研究提供基础材料。
主权项：1.一种黄河鲤肌肉成肌细胞系构建的方法，其特征在于黄河鲤肌肉成肌细胞系构建的方法按照以下步骤进行：一、无菌环境下获取鲤鱼肌肉组织；二、消化肌肉组织剪碎肌肉组织，用L15基础培养基浸泡2次、每次5min，去除L15基础培养基后用0.25％胰酶消化肌肉碎块3～5min，再加入0.2％Ⅱ型胶原酶继续消化过夜，然后再进行吹打，过滤、离心留沉淀即得到消化后细胞；三、细胞悬液制备步骤二得到的消化后细胞用L15基础培养基重悬得到细胞重悬液，并用ficoll液对细胞重悬液进行梯度密度离心，去掉第一层废液，吸取第二层细胞，用L15基础培养基洗涤2次第二层细胞得到细胞沉淀；四、细胞悬液进行计数按照105cellscm2将细胞沉淀用含10％胎牛血清的L15完全培养基重悬加入预先包被的六孔板中，在28℃条件下培养得到未纯化的黄河鲤成肌细胞；其中所述的L15完全培养基按照体积百分数由10～20％的胎牛血清、0.8～1.2％的L-谷氨酰胺、0.8～1.2％的青霉素链霉素混合液、0.8～1.2％的鲤鱼血清和余量的L15基础培养基组成；五、采用差速贴壁法对未纯化的黄河鲤成肌细胞进行3～5次纯化，再用胰酶进行细胞消化传代，即实现了黄河鲤肌肉成肌细胞系构建。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 一种黄河鲤肌肉成肌细胞系构建的方法
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