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申请/专利权人：硅羿科技(上海)有限公司
申请日：2021-09-03
公开（公告）日：2024-06-07
公开（公告）号：CN113717984B
主分类号：C12N15/40
分类号：C12N15/40;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/34;A01N63/60;A01P1/00;C12R1/19
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.07#授权;2022.04.01#著录事项变更;2021.12.17#实质审查的生效;2021.11.30#公开
摘要：本发明提供了一种抗烟草花叶病毒的核酸农药及其合成、纯化和应用，TMV‑cp基因两端分别含有一个T7启动子，序列如SEQIDNO.1所示，质粒pT7B‑TMV‑EcoRI‑EcoRI‑cp采用TMV‑cp基因，在T7启动子的两侧引入EcoRI酶切位点得到；加入内切酶EcoRI，消化获得体外转录的模板，加入含肌苷酸的三磷酸核苷混合物体外转录并纯化，得到TMV‑cpI‑dsRNA；本发明首次使用生物法合成经肌苷酸修饰的dsRNA，该核酸农药在不同温度和不同紫外条件下具有稳定性，具有防治烟草花叶病毒的巨大潜力；该核酸农药对环境无毒无害，成本控制及应用方面均获得良好效果，有望成为优秀的生物农药。
主权项：1.一种抗烟草花叶病毒核酸农药TMV-cpI-dsRNA在防治烟草花叶病毒中的应用，其特征在于：所述抗烟草花叶病毒核酸农药TMV-cpI-dsRNA为冻干剂，其制备方法包括如下步骤：S1、在包含TMV-EcoRI-EcoRI-cp的质粒中加入内切酶EcoRI，加入含肌苷酸的三磷酸核苷混合物进行体外转录，得到TMV-cpI-dsRNA，所述TMV-cpI-dsRNA的序列如SEQIDNO.3所示；所述TMV-EcoRI-EcoRI-cp的序列如SEQIDNO.2所示S2、在转录体系中加入DNaseI，37-40℃下保温0.5-1h，得到TMV-cpI-dsRNA粗品；采用阴离子交换层析，再经切向流超滤浓缩，去除体系中的离子、未反应的核苷三磷酸，获得纯化后的抗烟草花叶病毒核酸农药TMV-cpI-dsRNA液体；S3、对S2中的液体进行-80℃预冻后低温冷冻干燥，获得TMV-cpI-dsRNA冻干剂。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 硅羿科技(上海)有限公司 一种抗烟草花叶病毒的核酸农药及其合成、纯化和应用
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