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申请/专利权人：广东一方制药有限公司

摘要：本发明公开了一种蚂蟥的特征图谱的构建方法，包括：制备参照物溶液，所述参照物溶液包括对照药材溶液和对照品溶液，所述对照品溶液中包括尿嘧啶对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、水蛭胺C对照品、水蛭胺B对照品；制备供试品溶液；取预设量的所述参照物溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以甲酸为流动相B进行梯度洗脱，建立特征图谱。本发明可为蚂蟥药材及蚂蟥标准汤剂的质量控制提供数据基础，有效保证蚂蟥药材、标准汤剂产品质量的稳定性和可控性。

主权项：1.一种蚂蟥的特征图谱的构建方法在（1）或（2）中的应用：（1）蚂蟥药材与日本医蛭药材、菲牛蛭药材的区分；（2）蚂蟥药材和烫蚂蟥饮片的区分；其中，所述蚂蟥的特征图谱的构建方法包括以下步骤：制备参照物溶液，所述参照物溶液包括对照药材溶液和对照品溶液，所述对照品溶液中包括尿嘧啶对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、水蛭胺C对照品和水蛭胺B对照品；取蚂蟥样品，制粉后过45目~55目筛网，然后称取0.1g~1.2g与30%~70%的甲醇混合，所述30%~70%的甲醇的加入量为20mL~30mL，超声处理20min~40min后，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，制得供试品溶液；取预设量的所述参照物溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm，以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.005%~0.015%的甲酸为流动相B进行梯度洗脱，建立特征图谱；所述液相色谱仪的紫外检测波长为250nm~255nm；所述梯度洗脱按下述程序进行：0min~12min，流动相A为0，流动相B为100%；12min~15min，流动相A从0→1%，流动相B从100%→99%；15min~27min，流动相A从1%→8%，流动相B从99%→92%；27min~35min，流动相A从8%→11%，流动相B从92%→89%；35min~45min，流动相A从11%→12%，流动相B从89%→88%；45min~55min，流动相A从12%→21%，流动相B从88%→79%；55min~65min，流动相A从21%→30%，流动相B从79%→70%。

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