申请/专利权人：广东海洋大学

申请日：2022-04-13

公开（公告）日：2024-06-11

公开（公告）号：CN114807258B

主分类号：C12P13/02

分类号：C12P13/02;C07C231/24;C07C235/08;C07C233/18

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.11#授权;2022.08.16#实质审查的生效;2022.07.29#公开

摘要：本发明公开了一种从海红米糠中提取神经酰胺的方法，属于分离纯化技术领域。该方法包括：将米糠经鞘磷脂酶和纤维素酶进行双酶法酶解，过滤后用乙醇溶液浸泡，超声热提取，然后经石油醚萃取得到神经酰胺浸膏，神经酰胺浸膏经硅胶柱层析和SPE小柱得到神经酰胺。本发明通过双酶复合酶解的方法，联合超声波热提取与SPE柱层析技术，实现了对海红米糠中神经酰胺的高效提取和纯化。

主权项：1.一种从海红米糠中提取神经酰胺的方法，其特征在于，包括：将海红米糠经鞘磷脂酶和纤维素酶进行双酶法酶解，过滤后用乙醇溶液浸泡，超声热提取，然后经石油醚萃取得到神经酰胺浸膏，神经酰胺浸膏经硅胶柱层析和SPE小柱分离纯化得到神经酰胺；所述酶解包括：将所述鞘磷脂酶和纤维素酶配制成浓度为0.2~0.5wv%的酶解液；以g:mL计，所述米糠与所述酶解液的配比为1:3~5；以酶活力单位计，所述鞘磷脂酶和纤维素酶的配比为4:6；所述酶解的温度为35~45℃，时间为60~120min，pH为5~7；所述乙醇溶液的浓度为75%~95%，浸泡时间为1h；以g:mL计，所述双酶法酶解后过滤得到的产物与所述乙醇溶液的配比为1:500；所述超声热提取的功率为360w，温度为45℃，提取时间为1h；经石油醚萃取前需将所述超声热提取得到的产物进行过滤蒸发浓缩至乙醇浓度为10％的浓缩液；所述石油醚萃取包括：向所述浓缩液加入2倍的石油醚，搅拌0.5h后静置0.5h，收集上层醚相，萃取2次后合并醚相，回收石油醚，得到所述神经酰胺浸膏；所述硅胶柱层析包括：用300~400目的硅胶进行湿法装柱，以质量比计，所述神经酰胺浸膏的上样量与硅胶的配比为1~5:100；以体积比计，用石油醚和乙酸乙酯依照95:5、85:15、60:40、40:60的配比进行梯度洗脱，其中，所述95:5配比和所述85:15配比的用量各为1BV，所述60:40配比和所述40:60配比的用量各为2BV，洗脱速度为2~4BVh，分步收集流出液，用TLC检测流出液，合并具有相同成分的流出液，回收溶剂干燥；所述SPE小柱包括：将所述硅胶柱层析得到的产物用丙酮进行洗脱，以g:mL计，所述硅胶柱层析得到的产物与丙酮的配比为1:2，然后溶解湿法上样，上样量为0.1~0.5g；以体积比计，用乙酸乙酯和丙酮依照6:4、1:1的配比进行梯度洗脱，所述乙酸乙酯和丙酮的用量为2~2.5BV，洗脱速度为1~1.5BVh，工作压力为5~20bar，分步收集流出液，用TLC检测流出液，合并具有相同成分的流出液，回收溶剂，干燥得神经酰胺。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广东海洋大学 一种从海红米糠中提取神经酰胺的方法

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