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申请/专利权人：承德合润生物科技有限公司
摘要：本发明提供了一种实现iNKT细胞快速扩增的方法，属于细胞生物学技术领域。该方法首先将获得的外周血单个核细胞接种于培养皿中，添加含有α‑Galcer，麒麟菜多肽和IL‑2的培养液；之后将细胞置于37℃，5％CO2的细胞培养箱进行培养；之后每3天添加新的含有α‑Galcer，麒麟菜多肽和IL‑2的培养液，调整细胞浓度为2×106mL；培养12‑14天后，收集细胞，纯化得到iNKT细胞。使用本发明方法获得的iNKT具有高增殖能力和高杀伤活性。
主权项：1.一种实现iNKT细胞快速扩增的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（a）将获得的外周血单个核细胞接种于培养皿中，添加含有α-Galcer，麒麟菜多肽和IL-2的培养液；（b）将细胞置于37℃，5%CO2的细胞培养箱进行培养；（c）每3天添加新的含有α-Galcer，麒麟菜多肽和IL-2的培养液，调整细胞浓度为2×106mL；（d）培养12-14天后，收集细胞，纯化得到iNKT细胞；所述步骤（a）和步骤（c）中，所述培养液中所述麒麟菜多肽的浓度为100-2500μgmL；所述麒麟菜多肽的制备方法包括如下步骤：（1）选择新鲜的麒麟菜，去除残留杂质，并用清水清洗干净；（2）将洗净的麒麟菜烘干至恒重；（3）将烘干后的麒麟菜粉碎并过筛得到麒麟菜粉末；（4）加入10倍量的蒸馏水，配置得到麒麟菜溶液A；（5）加入1100倍量的胰蛋白酶，调节温度为37℃，调节pH值为7.5，酶解3h，得到麒麟菜溶液B；（6）将得到的麒麟菜溶液B在100℃加热10min，灭活蛋白酶，得到麒麟菜溶液C；（7）将得到的麒麟菜溶液C置于高速离心机中，10000rpm离心30min收集上清，得到麒麟菜溶液D；（8）将麒麟菜溶液D使用5kDa超滤膜进行浓缩，收集滤过液；（9）将滤过液冷冻干燥后，得到麒麟菜多肽。
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