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申请/专利权人：江苏科技大学
申请日：2024-03-28
公开（公告）日：2024-06-14
公开（公告）号：CN118186013A
主分类号：C12N15/89
分类号：C12N15/89;C12N15/90;C12N15/12;A01K67/04;C07K14/435
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.07.02#实质审查的生效;2024.06.14#公开
摘要：本发明公开了一种生产蜘蛛丝蛋白的家蚕的构建方法及其应用。本发明的生产蜘蛛丝蛋白的家蚕的构建方法，基于TALEN的基因敲入技术实现Nephilamadagascariensis圆网马达加斯加络新妇蛛蜘蛛丝基因majorampullatespidroin2MaSp2在家蚕丝素轻链基因TAA处的融合插入，并通过剪切肽2A将BmFibL与MaSp2分割，获得一种家蚕非转基因形式的丝素轻链融合表达系统，利用该方法可以大量表达外源蛋白，并将蚕丝的延展性显著提高约95.1％。
主权项：1.一种生产蜘蛛丝蛋白的家蚕的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1在家蚕丝素轻链基因FibL上确定一个TALENs的靶点，所述靶点位于家蚕丝素轻链基因FibL的第七个外显子上，包括TALEN左臂FibL-L、TALEN右臂FibL-R，FibL-L与FibL-R之间有17bp作为切割序列，切割序列距离家蚕丝素轻链基因FibL终止密码子TAA之间有34～17bp；2分别构建TALEN-L、TALEN-R表达质粒，并进行TALEN-LmRNA、TALEN-RmRNA的体外转录；3构建Donor载体：将MaSp2基因连接到pGEM-L-2A-NruI-CTD-DsReD-R载体上构成Donor载体；所述MaSp2基因的核苷酸序列如SEQIDNO:6所示；4将TALEN-LmRNA、TALEN-RmRNA和Donor载体混合，对家蚕胚胎进行显微注射，进行催青直到孵化，饲养孵化出来的蚁蚕作为G0代，将G0代的蚕蛾自交，获得G1代蚕卵，G1代中眼睛具有红色荧光个体即为可生产蜘蛛丝蛋白的家蚕个体。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 江苏科技大学 一种生产蜘蛛丝蛋白的家蚕的构建方法及其应用
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