申请/专利权人：北京大学现代农业研究院

申请日：2023-04-28

公开（公告）日：2024-06-14

公开（公告）号：CN116732022B

主分类号：C12N15/10

分类号：C12N15/10

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.14#授权;2024.01.09#实质审查的生效;2023.09.12#公开

摘要：本发明公开了一种植物超长基因组DNA的提取方法，属于植物分子生物学技术领域。本发明的植物超长基因组DNA的提取方法，将植物幼嫩的组织研磨成粉末后加入到细胞核提取液中，通过过滤和离心得到细胞核沉淀；用细胞核重悬缓冲液重悬细胞核，然后加入SDS裂解液；后用酚氯仿异戊醇、氯仿异戊醇和氯仿抽提，取上清加入异丙醇获取DNA沉淀，用乙醇清洗后晾干。本发明获得的DNA长度有明显优势，无需进一步纯化去除小片段，就可获得长度大于485Kb的片段。

主权项：1.一种植物超长基因组DNA的提取方法，其特征在于，将1-2g辣椒果实或南瓜、西瓜、番茄的幼嫩叶片或小麦的幼嫩叶片或者小麦胚芽鞘材料，在研钵中用液氮研磨至粉末状，转移粉末到含有20-40mL预冷的细胞核提取液中，并加入0.1%-0.2%的β-巯基乙醇，轻柔上下颠倒混匀，置于冰上；在冰上静置10min以上，待植物组织粉末完全溶解混匀后，分别采用Miracloth滤布、40μm滤膜、30μm滤膜过滤一次；过滤后的提取液于4℃下，50-60rcf离心3-5min两次，去除杂质，取上清，1000-2500rcf离心5min，弃上清得到细胞核沉淀；用10mL细胞核提取液重悬细胞核沉淀，清洗2次，弃上清；2）用5mL细胞核重悬缓冲液重悬洗涤后的细胞核沉淀，清洗一次，再次加入1-2ml细胞核重悬缓冲液，加入等体积的2×SDS裂解液；颠倒混匀后，于50℃金属浴或水浴锅中裂解0.5-2.5h；3）裂解完成后，待裂解液冷却至室温，加入3mL的酚氯仿异戊醇溶液抽提，10rpm混匀10min，4000g离心10min，用宽口枪头取上清加入到新的离心管；上清液中加入等体积的氯仿异戊醇抽提1次；再加入等体积的氯仿，抽提1次，取上清加入新的离心管中；加入0.7×体积的异丙醇溶液，轻轻混匀直到絮状沉淀析出；用移液器将絮状沉淀转移到1.5mL离心管中，用70%乙醇清洗两次，晾干30s，加水或TE缓冲液过夜溶解DNA；所述的细胞核提取液由0.5M蔗糖、10mMTris-HCl，pH8.0、10mM乙二胺四乙酸二钠，pH8.0、80mM氯化钾、1%聚乙烯吡咯烷酮、350mM山梨糖醇、0.5%TritonX-100、1mM精胺、1mM亚精胺、0.1%-0.2%巯基乙醇组成；所述的细胞核重悬缓冲液由150mM氯化钠、100mMTris-HCl，pH8.0、25mM乙二胺四乙酸二钠，pH8.0、350mM山梨糖醇组成；所述的SDS裂解液由20gL十二烷基磺酸钠、150mM氯化钠、100mMTris-HCl，pH8.0、25mM乙二胺四乙酸二钠，pH8.0、350mM山梨糖醇、0.1%十六烷基三甲基溴化铵组成。

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