申请/专利权人：浙江大学

申请日：2022-01-24

公开（公告）日：2024-06-18

公开（公告）号：CN114460019B

主分类号：G01N21/31

分类号：G01N21/31;G01N21/78;G01N33/53;G01N33/58

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.18#授权;2022.05.27#实质审查的生效;2022.05.10#公开

摘要：本发明公开了一种基于适配体的神经性贝类毒素比色传感器及检测方法，该传感器包括如下物质：96孔聚苯乙烯微孔板、络氨酸修饰的纳米金溶液、适配体稀释液、毒素样品稀释液和TMB溶液。取10μL浓度为0.3μM的适配体稀释液加入到96孔板中，加入20μL不同浓度的毒素样品稀释液，反应30分钟。向反应后溶液加入100μL络氨酸修饰的纳米金溶液，反应5分钟。最后加入5μLTMB溶液，反应5分钟。将反应好的96孔板放入酶标仪中，读取530nm和610nm处的吸光度，计算吸光度的比值即A610nmA530nm。本发明利用适配体对神经性贝类毒素特异性检测，通过TMB诱导纳米金聚沉实现对神经性贝类毒素的定量检测。本发明的检测方法成本低廉，操作便捷，检测时间短。

主权项：1.一种基于适配体的神经性贝类毒素比色传感器，其特征在于，该传感器包括96孔聚苯乙烯微孔板、络氨酸修饰的纳米金溶液、适配体BT10稀释液、神经性贝类毒素样品稀释液和二甲基联苯胺TMB溶液；适配体BT10稀释液与毒素样品稀释液体积比为1:2加入96孔聚苯乙烯微孔板，室温下混合孵育使两者结合；加入络氨酸修饰纳米金溶液，络氨酸修饰纳米金溶液与毒素样品稀释液体积比为5:1，未与毒素结合的适配体BT10会与纳米金结合从而保护纳米金免于聚沉；再加入二甲基联苯胺TMB溶液，二甲基联苯胺TMB溶液与毒素样品稀释液体积比为1:4，诱导纳米金聚沉，聚沉程度不同导致颜色及吸光度不同，从而构建出比色传感器检测神经性贝类毒素浓度；所述络氨酸修饰的纳米金溶液是：称取质量比为6:17的络氨酸粉末和氢氧化钾粉末放入干净的烧杯中，加入超纯水充分搅拌溶解；加热烧杯中的溶液至沸腾状态，然后迅速加入2mL质量分数为1%的氯金酸溶液；继续加热20分钟后，停止加热并冷却至室温；用透析袋对上述溶液透析过夜，得到络氨酸修饰的纳米金溶液；络氨酸修饰的纳米金降低神经性贝类毒素在纳米金表面的吸附；所述适配体BT10稀释液是：将适配体BT10粉末转速4000rpm，离心5分钟，之后加入pH=7.0的磷酸盐缓冲液将适配体BT10稀释成浓度为50µM的原液；然后进行适配体二级结构处理，具体为将装有上述原液的离心管90℃水浴加热5分钟，之后迅速放入4℃环境中冷却5分钟，最后室温下放置10分钟，完成二级结构处理；通过使用pH=7.0的磷酸盐缓冲液可以将适配体原液稀释成不同浓度；所述毒素样品稀释液是：将神经性贝类毒素Brevetoxin-2溶液用纯水稀释成不同浓度。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江大学 一种基于适配体的神经性贝类毒素比色传感器及检测方法

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