申请/专利权人：深圳华大临床检验中心

申请日：2019-11-26

公开（公告）日：2024-06-18

公开（公告）号：CN112946150B

主分类号：G01N30/88

分类号：G01N30/88

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.18#授权;2021.07.02#实质审查的生效;2021.06.11#公开

摘要：本发明公开了一种快速检测人体尿液中高香草酸、香草扁桃酸、5‑羟基吲哚乙酸及肌酐的方法及其试剂盒。该方法包括下述步骤1配制样本稀释工作液；2在避光条件下，取尿液样本并向其中加入EDTA、Na2S2O3，然后加入乙酸进行酸化，混匀得到待测尿液样本；3取待测尿液样本、校准品、尿液质控品与样本稀释液工作液混合，封膜，涡旋、离心，取上清液采用液相色谱‑质谱进行检测。在检测随机尿液制备而成的尿液样本时，仅需10微升尿液样本就可以一次性定量高香草酸、香草扁桃酸、5‑羟基吲哚乙酸及肌酐，且前处理方法简单快捷，节省了操作时间，根据这些指标能够有效的筛查和诊断人体中的神经母细胞瘤、类癌，辅助筛查嗜铬细胞瘤等。

主权项：1.一种快速同时检测人体尿液中高香草酸、香草扁桃酸、5-羟基吲哚乙酸及肌酐的方法，包括下述步骤：1）配制样本稀释工作液：将内标稀释液母液使用超纯水稀释得到；2）样本预处理：在避光条件下，取尿液样本并向其中加入EDTA溶液、Na2S2O3溶液以及乙酸进行酸化，混合均匀得到待测尿液样本；3）样本处理：取待测尿液样本、校准品、尿液质控品各10μL，加入至各自对应的96深孔板内，然后每孔分别加入190μL样本稀释工作液，封膜，涡旋、离心，取上清液采用液相色谱-质谱进行检测；其中，所述内标稀释液母液为含氘代香草扁桃酸标准品、氘代高香草酸标准品、氘代5-羟基吲哚乙酸标准品和氘代肌酐标准品的甲醇溶液；所述校准品为人工尿液样品；其组成为人工尿液、香草扁桃酸标准品、高香草酸标准品、5-羟基吲哚乙酸标准品和肌酐标准品；所述尿液质控品，包括高香草酸标准品、香草扁桃酸标准品、5-羟基吲哚乙酸标准品和肌酐标准品为正常浓度的人工尿液样品和高香草酸标准品、香草扁桃酸标准品、5-羟基吲哚乙酸标准品和肌酐标准品为异常浓度的人工尿液样品；所述步骤3）中，所述液相色谱-质谱的条件如下：液相色谱条件：流动相，包括流动相A和流动相B；所述流动相A由去离子水和甲酸组成，两者体积比为1000:1；所述流动相B由甲醇和甲酸组成，两者体积比为1000:1；超高效液相色谱：WatersACQUITYi-classUPLC液相系统洗脱方式为梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序如下： 质谱条件：扫描方式：多重反应监测MRM；所述高香草酸、香草扁桃酸、5-羟基吲哚乙酸及肌酐的质谱信息如下：高香草酸：保留时间为1.86分钟；定量离子对（MZ）181.0742122.0678；香草扁桃酸：保留时间为0.83分钟；定量离子对（MZ）197.0742138；5-羟基吲哚乙酸：保留时间为1.65分钟；定量离子对（MZ）190.1481146.03；肌酐：保留时间为0.26分钟；定量离子对（MZ）113.9643.91。

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