申请/专利权人：佛山科学技术学院

申请日：2024-03-28

公开（公告）日：2024-06-21

公开（公告）号：CN118222679A

主分类号：C12Q1/6848

分类号：C12Q1/6848;C12Q1/70;C12N15/113;C12N15/11;C12R1/93

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.06.21#公开

摘要：本发明公开了一种基于RPA‑CRISPRCas12a的一管法检测非洲猪瘟病毒的方法，其包括以下步骤：DNA模板合成：合成ASFV检测的靶标质粒标准品，然后制备如序列SEQIDNO.1～14所示的14个引物crRNA，然后进行合成处理，进行DNA纯化，体外转录，RNA纯化，得到纯化后crRNA；RPA扩增：设计用于RPA扩增的RPA‑F和RPA‑R，得到如序列SEQIDNO.16～35所示的RPA扩增引物；RPA筛选后：将所述RPA扩增引物进行电泳，得到筛选后RPA引物对；RPA‑crRNA组合筛选：将所述筛选后RPA引物对、所述ASFV检测的靶标质粒标准品和所述纯化后crRNA进行筛选处理，得到筛选后RPA‑crRNA组合；CRISPRCas12a检测：利用CRISPRCas12a检测体系对非洲猪瘟病毒进行一管法检测。本发明提供的基于RPA‑CRISPRCas12a的一管法检测非洲猪瘟病毒的方法精准度高，与其他病毒不存在交叉反应。

主权项：1.一种基于RPA-CRISPRCas12a的一管法检测非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于，其包括以下步骤：DNA模板合成：合成ASFV检测的靶标质粒标准品，然后制备如序列SEQIDNO.1～14所示的14个引物crRNA，然后使用两条互补的引物crRNA进行合成处理，得到含有T7启动子的双链DNA模板；DNA模板纯化：将所述双链DNA模板进行DNA纯化，得到纯化后DNA模板；体外转录：将所述纯化后DNA模板使用全式金T7转录试剂盒进行体外转录处理，得到转录crRNA；RNA纯化：将所述转录crRNA进行RNA纯化，得到纯化后crRNA；RPA扩增：设计用于RPA扩增的RPA-F和RPA-R，得到如序列SEQIDNO.16～35所示的RPA扩增引物；RPA筛选后：将所述RPA扩增引物进行电泳，得到筛选后RPA引物对；RPA-crRNA组合筛选：将所述筛选后RPA引物对、所述ASFV检测的靶标质粒标准品和所述纯化后crRNA进行筛选处理，得到筛选后RPA-crRNA组合；CRISPRCas12a检测：利用CRISPRCas12a检测体系对非洲猪瘟病毒进行一管法检测，所述CRISPRCas12a检测体系包括所述筛选后RPA-crRNA组合。

全文数据：

权利要求：

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