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申请/专利权人：武汉轻工大学
申请日：2024-04-19
公开（公告）日：2024-06-21
公开（公告）号：CN118222598A
主分类号：C12N15/70
分类号：C12N15/70;C12N15/74;C12N1/21;C12N15/31;C12N15/52;C12N15/54;C12N15/60;C12R1/19;C12R1/46
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.21#公开
摘要：本发明公开了一种从猪源高耐药性和高致病性细菌中缺失基因的高效方法及其应用，属于基因工程领域。本发明方法包括如下步骤：将含有目的基因上下游同源臂的自杀性重组质粒整合到细菌基因组中获得的单交换子在含抗生素的培养基中进行传代培养和纯化；纯化的单交换子转接到含黄芩苷的液体培养基中，在能丢失自杀性重组质粒的条件下进行传代培养；培养物接种到固体培养基上培养至长出单菌落，通过抗生素反向筛选方法从这些单菌落中筛选出双交换子；PCR鉴定双交换子是否缺失了目的基因。本发明能够使高耐药性和高致病性细菌如猪ExPEC、猪链球菌的目的基因快速高效缺失，为多重耐药菌株基因缺失弱毒疫苗的开发提供理论基础和技术支撑。
主权项：1.一种从细菌中缺失基因的高效方法，其特征在于，包括如下步骤：1将含有目的基因上下游同源臂的自杀性重组质粒整合到细菌基因组中获得单交换子；2将单交换子在含抗生素的培养基中进行传代培养和纯化；3将步骤2得到的单交换子转接到含黄芩苷的液体培养基中，在能丢失自杀性重组质粒的条件下进行传代培养；4将步骤3得到的培养物接种到固体培养基上培养至长出单菌落，将单菌落同时点在无抗生素和含抗生素的固体培养基上培养，筛选在无抗生素的固体培养基上生长、在含抗生素的固体培养基上不生长的单菌落；5通过PCR鉴定步骤4筛选到的单菌落是否缺失了目的基因。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 武汉轻工大学 一种从猪源高耐药性和高致病性细菌中缺失基因的高效方法及其应用
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