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申请/专利权人：江西赛基生物技术有限公司
申请日：2024-05-23
公开（公告）日：2024-06-21
公开（公告）号：CN118222630A
主分类号：C12N15/85
分类号：C12N15/85;C12N15/12;C12N5/10
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.21#公开
摘要：本发明提供一种稳转表达CD16跨膜蛋白细胞系的构建方法及应用，成功构建得到稳定表达CD16的人胚肾293细胞Homosapiens，同时所述构建方法中，包括一种得到瞬时转染率高的细胞的方法和一种加压筛选稳定表达蛋白的方法，通过使用PEI转染方式，将质粒转染进HEK293F悬浮细胞，细胞通过内吞方式吸收转染复合物，然后在细胞膜上表达外源蛋白，并添加抗生素增加压力，使细胞稳定表达膜蛋白CD16，同时转染率均可达到接近100%，且所述细胞系可稳定传代7代。
主权项：1.一种稳转表达CD16跨膜蛋白细胞系的构建方法，其特征在于，所述构建方法中，包括将含有CD16DNA目的片段的质粒转染到细胞系中，所述DNA目的片段具有如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列；所述构建方法中，还包括以下步骤：（1）细胞培养；（2）G418对步骤（1）中细胞最小致死量的筛选；（3）配制转染复合物；（4）将质粒转染到细胞系中；（5）使用G418筛稳转细胞系，培养得到稳定表达CD16蛋白的单克隆细胞系；所述步骤（3）中的转染复合物包括转染试剂和质粒；所述转染试剂为PEI转染试剂，所述PEI转染试剂中连续性片段的相对分子量大小为35k-45k；所述PEI转染试剂的加入量为40-60μL；所述步骤（3）中使用的培养基为减血清培养基，取PEI转染试剂和减血清培养基混合。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 江西赛基生物技术有限公司 一种稳转表达CD16跨膜蛋白细胞系的构建方法及应用
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