申请/专利权人：浙江玖世生物科技有限公司

申请日：2022-10-14

公开（公告）日：2024-06-21

公开（公告）号：CN115521946B

主分类号：C12P7/22

分类号：C12P7/22;C12N9/04;C12N11/00;C01G23/047;B82Y30/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.21#授权;2024.03.15#专利申请权的转移;2023.01.13#实质审查的生效;2022.12.27#公开

摘要：本发明公开了一种TiOx基光酶催化剂合成R‑1‑[3,5‑二三氟甲基]苯乙醇的方法。本发明首先制备表面富钛氧层的二氧化钛纳米管和AKR‑114‑189醛酮还原酶聚集体，然后按照质量比1：0.5～2混合搅拌得到光酶催化剂TiOxAKR‑CLEs；在反应器中加入反应溶剂、NADP+、光酶催化剂TiOXAKR‑CLEs、3,5‑双三氟甲基苯乙酮，氙灯光照下反应12～24小时；取反应液上清，使用无水正己烷对上清液进行萃取，加热减压旋干，得到R‑1‑[3,5‑二三氟甲基]苯乙醇。本发明方法操作简单，成本低，催化效率高，反应条件温和，适合工业化应用。

主权项：1.一种TiOx基光酶催化剂合成R-1-[3,5-二三氟甲基]苯乙醇的方法，其特征在于：步骤1制备表面富钛氧层的二氧化钛纳米管；具体方法是：将二氧化钛粉末P25分散到NaOH溶液中，常温下搅拌均匀，倒入反应釜中，120～150℃下反应12～36小时；反应产物用去离子水和无水乙醇离心洗涤至沉淀显中性，真空干燥；干燥后产物加入盐酸溶液在常温下酸化6～12小时，然后用去离子水和无水乙醇离心洗涤至沉淀显中性，真空干燥，300～600℃煅烧4～8小时；以四乙基甲胺基钛IV为钛源前驱体，以H2O为氧源前驱体进行原子层沉积，沉沉积温度为150～250℃，得到表面富钛氧层的二氧化钛纳米管；步骤2制备AKR-114-189醛酮还原酶聚集体；具体方法是：将AKR-114-189醛酮还原酶突变体细胞接种到含有氯霉素、卡那霉素和氨苄青霉素的LB培养基中，30～35℃下在振荡培养箱中培养至OD600＝0.6～0.8；添加L-+-阿拉伯糖、脱水四环素盐酸盐aTc和对叠氮-L-苯丙氨酸，20～25℃下诱导蛋白质表达15～20小时，以8000～10000rpm离心沉淀5～10分钟，获得非天然氨基酸修饰后的醛酮还原酶的细菌；将非天然氨基酸修饰后的醛酮还原酶的细菌沉淀使用PBS缓冲液重悬，使用超声波处理，使细菌裂解；以8000～10000rpm离心10～15分钟，得到游离酶；微波辅助下，加入双叠氮交联剂和CuI溶液，参与叠氮化物-炔烃环加成点击反应使酶固定化，离心分离得到AKR-114-189醛酮还原酶聚集体；所述的AKR-114-189醛酮还原酶突变体细胞是对远离源自海栖热袍菌ThermotogamaritimaMSB8的醛酮还原酶AKR活性位点的两个位点114Y-189Q进行突变后得到；步骤3将表面富钛氧层的二氧化钛纳米管和AKR-114-189醛酮还原酶聚集体按照质量比1：0.5～2混合，搅拌3～6小时后得到光酶催化剂TiOxAKR-CLEs；步骤4在反应器中加入反应溶剂、NADP+、光酶催化剂TiOXAKR-CLEs、3,5-双三氟甲基苯乙酮，在氙灯光照下反应12～24小时；步骤5取反应液上清，使用无水正己烷对上清液进行萃取，之后加热减压旋干，得到R-1-[3,5-二三氟甲基]苯乙醇。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江玖世生物科技有限公司 一种TiO_x基光酶催化剂合成(R)-1-[3,5-二(三氟甲基)]苯乙醇的方法

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