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一种基于流式细胞术的诱导痰嗜酸性粒细胞定量方法 

申请/专利权人:南方医科大学南方医院

申请日:2024-05-28

公开(公告)日:2024-06-25

公开(公告)号:CN118243594A

主分类号:G01N15/1409

分类号:G01N15/1409;G01N15/1429

优先权:

专利状态码:在审-公开

法律状态:2024.06.25#公开

摘要:本发明公开了一种基于流式细胞术的诱导痰嗜酸性粒细胞定量方法。主要包括痰液化步骤、痰细胞悬浮液染色步骤和设门分析步骤。其中痰液化步骤包括对痰液样品进行称重,加入DTE震荡孵育,进行过滤、离心、洗涤获得细胞悬液;痰细胞悬浮液染色步骤包括在定量细胞悬液中加入抗体,并加入鞘液洗涤,保留残留鞘液并加入7‑AAD进行孵育;设门分析步骤包括根据抗体圈定出白细胞,去除死细胞,进而确定圈定粒细胞和嗜酸性粒细胞,测量嗜酸性粒细胞数量。本发明的方法能有效避免人工镜检的错误和减小误差,提升检验结果的准确性和检验效率,同时可计算单位质量的诱导痰中嗜酸性粒细胞的数量,实现精准定量。

主权项:1.一种基于流式细胞术的诱导痰嗜酸性粒细胞定量方法,其特征在于,所述方法包括:痰液化步骤:首先将痰液置入平皿中混匀,将所述痰液中的粘稠液取至离心管进行称重获得痰液质量M;然后在所述离心管加入1,4-二硫代赤藓醇,震荡后在摇床上避光孵育,进行过滤、离心和洗涤获得细胞悬液;抗体染色步骤:取所述细胞悬液加入到绝对计数管中,所述绝对计数管具有总微球数量Q1;加入抗体,所述抗体包括CD16-FITC、CD66b-PE、siglec8PE-Cy7、CD14APC和CD45APC-Cy7,然后加入鞘液洗涤,保留残留鞘液并加入7-AAD进行孵育,获得样品体积V1;设门分析步骤:取加样体积V2的痰细胞悬浮液,按CD45APC-Cy7抗体设置阈值,圈出侧向散射光范围增加以及CD45阳性区域细胞,排除非白细胞以及细胞碎片;圈定微球所在区域,获得微球数Q2,反向设门,去除微球所在区域,根据前向散射光范围和侧向散射光范围去除碎片;根据前向散射光范围和侧向散射光范围取单个核心细胞;通过CD45阳性区域圈定白细胞;然后去除死细胞,通过7-AAD阴性判断白细胞存活率;通过CD66b阳性、CD14阴性区域圈定粒细胞,最后通过siglec8阳性、CD16阴性区域圈定嗜酸性粒细胞,测量嗜酸性粒细胞数Qeos。

全文数据:

权利要求:

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