申请/专利权人：华中科技大学同济医学院附属协和医院;深圳华中科技大学研究院

申请日：2024-01-27

公开（公告）日：2024-06-25

公开（公告）号：CN118236521A

主分类号：A61K49/22

分类号：A61K49/22;A61K39/395;A61K47/66;A61K47/69;A61P37/06

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.06.25#公开

摘要：本发明提供了一种靶向抗体介导排斥反应的超声造影剂及其制备方法和应用，属于医学材料技术领域。本发明中的超声造影剂以脂质为壳膜材料，壳膜内部包裹有气态氟碳，壳膜材料表面结合有链霉亲和素，链霉亲和素与生物素修饰的CD16a抗体偶联。本发明首次以CD16a分子为靶点制备特征性靶向抗体介导排斥反应的分子探针，与传统的分子探针相比，提高分子探针对AMR的靶向准确性，实现了AMR的便携、实时评估。本发明在抗体介导排斥反应的预防或治疗中，尤其在器官移植术后移植物存活率的提高中具有良好的应用前景。

主权项：1.一种靶向抗体介导排斥反应的超声造影剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：生物素化微泡的制备1成膜：先将DSPC，DSPE-PEG2000，DSPE-PEG2000-Biotin溶于三氯甲烷制成浓度为18～22mgmL的磷脂溶液，然后将其按8～9:0.5～1:0.5～1的摩尔比混匀，接着在氮气流的冲击下使三氯甲烷挥发，直至三氯甲烷挥发干净，并在容器壁上形成一层均匀的磷脂薄膜；2抽真空：用封口膜封住容器口，并在封口膜上扎小孔，将容器放入抽滤瓶中抽真空2h以上，充分去除残余的三氯甲烷；3水化：容器中加入5～6mL水化液，55～60℃下超声8～12min至溶液澄清透明，并分装入西林瓶，封口；4换气：抽尽西林瓶中的空气，并继续抽真空25～35min，然后往西林瓶中充入全氟丙烷0.8～1.2min，充完后保持25～35s，使气体混合均匀，接着继续抽真空4～6s，重复3次上述操作以完成气体置换；5震荡：换气后的西林瓶震荡25～35s，然后静置8～12min；6微泡分离：震荡完成后的液体为微泡MBs和纳泡NBs的混合物，离心将微泡和纳泡进行分离，离心参数为280～320rpm，2～4min，上层粒径较大的微泡即为所述生物素化微泡；步骤二：靶向微泡MBCD16a的制备1亲和素孵育：将所述生物素化微泡与链霉亲和素孵育，每106～8微泡孵育2～4μg链霉亲和素，室温旋转孵育28～32分钟；2离心：280～320rpm离心2～4min，共离心3次以除去下层过量亲和素；3抗体孵育及离心：将除去过量亲和素的微泡与生物素化抗大鼠CD16a抗体孵育，每107～9微泡孵育2～3μg抗体，室温旋转孵育28～32min，然后280～320rpm离心2～4min，离心3次，弃下层除去游离的抗体，至此，所述靶向微泡MBCD16a，也就是所述超声造影剂，即制备完成。

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