龙图腾网&IPTOP
- 微信扫码登录
- 账号密码登录
- 短信登录/注册
申请/专利权人：中国药科大学
申请日：2024-04-28
公开（公告）日：2024-06-25
公开（公告）号：CN118243823A
主分类号：G01N30/02
分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.25#公开
摘要：本发明公开一种识别12α羟基胆汁酸的酶辅助液质联用检测方法及应用，属于生物检测技术领域。本发明公开经密码子优化后的12α‑HSDH基因序列，如SEQIDNo：1所示，并经重组载体转化、诱导表达和蛋白纯化后得到目标蛋白，动力学分析数据表明12α‑HSDH在体外高效、特异性催化12HBAs的脱氢反应。基于12α‑HSDH基因的上述特性，结合超高效液相色谱串联质谱方法分析，定义BAs的转化率为1‑AbAa％，通过BAs标准品制定转化率指标识别12α羟基胆汁酸，用于12HBAs和非12HBAs的鉴定；此外，本申请应用于多基源的混合生物基质，提供一个包含C12位点的信息的BAs谱，可用于病理状态下诊断BAs的变化。
主权项：1.一种识别12α羟基胆汁酸的酶辅助液质联用检测方法，其特征在于，该方法基于由迟缓埃格特菌株DSM2243编码的12α-HSDH进行，并对12α-HSDH基因序列进行密码子优化，优化后的12α-HSDH在体外特异性催化12HBAs的脱氢反应，优化后的12α-HSDH全长基因的核苷酸序列如SEQIDNo：1所示；具体检测过程如下：1使用两份相同的胆汁酸样品a和b，样品b中投入12α-HSDH溶液和辅因子NAD+，样品a不加12α-HSDH，用作阴性对照，反应在中性缓冲液中进行；2反应混合物中加入有机试剂液液萃取，静置分层后，转移出有机层，吹干，残留物重新溶解在内标溶液中，离心后，上清液进入仪器分析；3对上清液进行超高效液相色谱串联质谱分离检测：利用高效液相色谱对步骤1制备的样品a和b进行分离，再通过质谱检测样品a和b中的BAs质荷比的响应；4将步骤3采集的数据，使用同位素内标相对定量，得到样品a和b中BAs的峰面积A，定义BAs的转化率为1-AbAa％，其中，Ab为样品b的峰面积、Aa为样品a的峰面积，通过BAs标准品制定转化率指标识别12α羟基胆汁酸。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国药科大学 识别12α羟基胆汁酸的酶辅助液质联用检测方法及应用
免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。
主营中国专利交易买卖与专利转让许可,高校科技成果推广与科技成果转化,知识产权运营管理与平台开发,科技人才专家库与科技猎头等科技服务
开放平台
担保交易
惠及多方
会员特惠
专属平台
适合多方
数据共享
功能齐全
皖公网安备 34010402703815号