申请/专利权人：江南大学

申请日：2021-07-27

公开（公告）日：2024-06-25

公开（公告）号：CN113567686B

主分类号：G01N33/74

分类号：G01N33/74;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/533;G01N33/531

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.25#授权;2021.11.16#实质审查的生效;2021.10.29#公开

摘要：本发明公开了一种基于通用探针检测牛奶中雌二醇的方法，属于荧光定量免疫分析快速检测技术领域。本发明基于量子点荧光微球QBs、重组蛋白ASPA、兔抗鼠IgG二抗anti‑IgG构建了两种通用探针QBs@SPA和QBs@SPA@anti‑IgG；之后基于所制备的通用探针、抗雌二醇的单克隆抗体、试纸条T线抗原、C线二抗，制备了免疫层析检测体系，其中游离雌二醇单抗和通用探针分别作为识别元件和信号供体，最大限度地释放了抗体的Fab区，提高了检测灵敏度，为牛奶中雌激素的定量分析提供了一种快速灵敏稳定有效的即时检测方法。

主权项：1.一种基于通用探针QBs@SPA@anti-IgG检测牛奶中雌二醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：1将通用探针QBs@SPA@anti-IgG、雌二醇单抗和待测溶液进行混合，得到待测样品；其中通用探针QBs@SPA@anti-IgG、雌二醇单抗和待测溶液的用量比为4μL：0.05μg：50μL；通用探针QBs@SPA@anti-IgG的制备包括如下步骤：1将QBs分散于PB缓冲液中，混合均匀；之后加入EDC活化剂孵育震荡；再加入SPA，继续孵育震荡，得到混合物；其中所述的QBs和EDC的质量比为35～45：1，所述的QBs和SPA的质量比为15～25：1；2将BSA溶液加入步骤1的混合物中进行封闭，得到封闭后的混合物；3将封闭后的混合物离心，得到通用探针QBs@SPA；4将通用探针QBs@SPA重悬于PB缓冲液，得到通用探针QBs@SPA悬浮液，之后和EDC混合均匀，再加入抗IgG抗体，孵育、离心，得到通用探针QBs@SPA@anti-IgG；其中通用探针QBs@SPA和抗IgG抗体的质量比为19～21：1；通用探针QBs@SPA和EDC的质量比为90～110：1；2将待测样品滴在免疫层析试纸条的样品垫上；之后将免疫层析试纸条放在37℃孵育15min后，测试T线、C线的荧光值；所述免疫层析试纸条的制备方法，包括如下步骤：将0.05～0.6mgmL雌二醇完全抗原溶液喷涂到硝酸纤维素膜上作为检测线T线，喷涂速度为1μLcm；将0.2mgmLanti-IgG抗体溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，作为质控线C线；T线、C线间距4～6mm，干燥，得到含有检测线、质控线的硝酸纤维素膜；之后将样品垫、含有检测线和质控线的硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在PVC底板上组装成试纸条；3将测试得到的T线、C线的荧光值代入标准曲线，得到待测溶液中雌二醇的浓度；标准曲线为：其中，B0为设定浓度为0的标准品测得的TC比值；B为相应浓度雌二醇对应的TC比值；CE2为雌二醇浓度；所述检测牛奶中雌二醇的方法的IC50＝0.93ngmL；检测范围：0.01～100ngmL。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江南大学 一种基于通用探针检测牛奶中雌二醇的方法

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