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申请/专利权人：南京师范大学
申请日：2022-04-07
公开（公告）日：2024-06-25
公开（公告）号：CN114774349B
主分类号：C12N5/071
分类号：C12N5/071
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.25#授权;2022.08.09#实质审查的生效;2022.07.22#公开
摘要：本发明公开了一种暗纹东方鲀原代肾细胞贴壁培养方法，包括以下步骤：（1）选取体型适中且健康的暗纹东方鲀稚鱼，对鱼体进行消毒后，无菌操作解剖取得肾脏组织；（2）在含青霉素‑链霉素双抗溶液的培养液中清洗，剪碎，在含EDTA的胰蛋白酶中37℃消化，消化后收集到灭菌离心管中，离心后得到肾细胞沉淀；（3）向细胞沉淀中加入适量预温的含暗纹东方鲀血清的完全培养液，得到重悬浮的细胞悬液，转入多聚赖氨酸预处理的细胞培养瓶中培养；本发明首次成功培养出暗纹东方鲀原代肾细胞，所构建的肾细胞原代培养方法简单，培养所需材料易获取，细胞贴壁时间短，生长形态良好，为暗纹东方鲀新品种选育、病害防控、免疫基因功能等研究提供细胞水平材料。
主权项：1.一种暗纹东方鲀原代肾细胞贴壁培养方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）暗纹东方鲀稚鱼的选取：选取健康的暗纹东方鲀，在非应激状态下饥饿24小时；（2）细胞培养载体的预处理：使用多聚赖氨酸预处理细胞培养载体底面，细胞级无菌水清洗细胞培养载体底部，晾干细胞培养载体备用；（3）肾组织的处理：将肾组织放置于含青霉素-链霉素的D-Hanks液中，清洗处理后剪碎；（4）肾组织的消化：剪碎后的肾组织转移至含EDTA的胰蛋白酶中消化，消化后用细胞滤网过滤，用含胎牛血清的细胞培养液冲洗细胞滤网，同时终止消化，离心后弃上清，得到细胞；（5）原代培养：向细胞中加入适量的完全培养液，用移液枪反复轻轻吹打混匀，将细胞悬液转入细胞培养载体中，置于细胞培养箱培养；步骤（4）中，剪碎的肾组织于37℃消化，消化时间为30-50分钟，消化期间每隔5min用无菌枪头轻轻搅拌混匀一次，消化后的肾组织成浆状，可以直接通过100µm细胞滤网；步骤（5）中，完全培养液包括：RMPI1640基础培养液中加入胎牛血清、暗纹东方鲀血清、青霉素-链霉素双抗。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京师范大学 一种暗纹东方鲀原代肾细胞贴壁培养方法
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