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DNA-孔隙-聚合酶复合物的酶促富集 

申请/专利权人:豪夫迈·罗氏有限公司

申请日:2019-05-27

公开(公告)日:2024-06-25

公开(公告)号:CN112204154B

主分类号:C12Q1/6869

分类号:C12Q1/6869

优先权:["20180528 US 62/677142"]

专利状态码:有效-授权

法律状态:2024.06.25#授权;2021.01.26#实质审查的生效;2021.01.08#公开

摘要:本发明提供一种用于分离测序复合物的方法,所述方法包括在与聚合酶共价连接的纳米孔和与纯化部分缔合的寡核苷酸之间形成复合物,使用能够结合所述纯化部分的固体支撑物从所述复合物分离出任何未结合未复合的纳米孔和寡核苷酸,以及使用酶组合物从所述固体支撑物裂解结合的复合物。

主权项:1.一种用于分离测序复合物的方法,所述方法包括:a将富集引物与样品DNA退火以形成经退火的模板寡核苷酸,其中所述样品DNA已经与至少一个衔接子连接,所述富集引物包含与衔接子的一部分互补的寡核苷酸、可酶促裂解的接头和纯化部分,所述衔接子包含能够与所述富集引物结合的引物识别序列,并且所述纯化部分是辅助纯化所述测序复合物的部分;b纯化所述经退火的模板寡核苷酸;c将与聚合酶共价连接的纳米孔与所述经退火的模板寡核苷酸组合以形成杂烩,其中所述杂烩是包含经退火的模板和所述与聚合酶共价连接的纳米孔的复合物;d将所述杂烩与能够与纯化部分结合的固体支撑物组合以产生富集的杂烩;以及e以酶组合物裂解接头以释放所述纯化部分,从而释放所述测序复合物以提供富集的测序复合物溶液,其中所述酶组合物包含核酸内切酶VIII、核酸内切酶III、裂解酶、糖酵解酶或其组合。

全文数据:

权利要求:

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