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申请/专利权人：云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所

摘要：本发明提供了一种赭曲霉毒素A胶体金标记物及其制备方法和应用，属于毒素检测技术领域。本发明通过设计采用特定原料和制备方法，包括改性纳米金颗粒、赭曲霉毒素A单克隆抗体和特定的核酸适配体，得到了一种赭曲霉毒素A胶体金标记物，能够用于快速高灵敏检测农产品中的赭曲霉毒素A。本发明实现了对胶体金合成体系的改性，并且能够更加专一性的识别赭曲霉毒素A，且灵敏度高，操作简便，有效避免假阳性和假阴性，可广泛应用于农产品中赭曲霉毒素A的快速测定。

主权项：1.一种赭曲霉毒素A胶体金标记物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将改性纳米金颗粒与赭曲霉毒素A单克隆抗体混合，反应得到修饰后的金标记物；S2、将核酸适配体、修饰后的金标记物与表面活性剂混合，得到赭曲霉毒素A胶体金标记物；所述核酸适配体的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；S1中，所述改性纳米金颗粒与赭曲霉毒素A单克隆抗体的重量比为3~5:50~80；S1中，所述反应的温度为30~50℃；所述反应的时间为2~4h；S1中，所述改性纳米金颗粒以改性纳米金颗粒溶液的形式加入反应，所述改性纳米金颗粒溶液的溶剂为PBS缓冲溶液；所述PBS缓冲溶液包括以下终浓度的组分：OVA1~3%，TritonX1140.05~0.2%，NonidetP400.05~0.2%，β-1,3葡聚糖1~3%，羧甲基葡聚糖0.5~1.5%；S2中，所述核酸适配体以核酸适配体溶液的形式加入反应，所述核酸适配体溶液的溶剂为3-N-吗啡啉-2-羟基丙磺酸钠缓冲液；所述3-N-吗啡啉-2-羟基丙磺酸钠缓冲液的浓度为10~30mmolL；所述核酸适配体溶液中核酸适配体的浓度为0.5~1nmolL；S2中，所述表面活性剂为二甲基双十六烷基溴化铵；所述表面活性剂的浓度为10~20molL；S2中，所述表面活性剂与核酸适配体溶液的体积比为1:1.5~2.5；所述混合的温度为30~50℃；所述混合伴随震荡，所述震荡的时间为30~50min；所述改性纳米金颗粒通过包括以下步骤的制备方法得到：S1.1、将乙烯基三2-甲氧基乙氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷和HCl溶液混合，反应得到改性剂；S1.2、将纳米金溶液与所述改性剂混合，在70~90℃油浴条件下反应得到改性纳米金颗粒；所述纳米金溶液通过包括以下步骤的制备方法得到：将柠檬酸三钠溶液与氯金酸溶液混合，反应得到纳米金溶液；所述柠檬酸三钠溶液的浓度为5~10%；所述氯金酸溶液的浓度为0.5~1.5%；所述柠檬酸三钠溶液与氯金酸溶液混合的体积比为4:4.5~5.5；所述反应的温度为90~110℃；所述反应的时间为8~12h；S1.1中，所述乙烯基三2-甲氧基乙氧基硅烷以乙烯基三2-甲氧基乙氧基硅烷溶液的形式加入反应；所述乙烯基三2-甲氧基乙氧基硅烷溶液的浓度为0.4~0.8mgmL；所述乙烯基三甲氧基硅烷以乙烯基三甲氧基硅烷溶液的形式加入反应；所述乙烯基三甲氧基硅烷溶液的浓度为0.6~1.0mgmL。

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百度查询： 云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所 一种赭曲霉毒素A胶体金标记物及其制备方法和应用