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申请/专利权人：广州金域医学检验中心有限公司

摘要：本发明涉及一种血浆氨基酸的在线衍生化检测方法，包括如下步骤：对加入有氨基酸内标溶液的待测血浆样本进行前处理，得到前处理试液；采用柱前在线衍生化高效液相色谱法对所述前处理试液中的氨基酸进行检测。本发明避免了衍生化试剂的残留导致试剂间的交叉污染，以及降低了衍生产物不稳定、易分解的风险；同时，在吸入前处理试液后采用溶剂洗针避免了携带效应。

主权项：1.一种血浆氨基酸的在线衍生化检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：对加入有氨基酸内标溶液的待测血浆样本进行前处理，制备前处理试液；采用柱前在线衍生化高效液相色谱法对所述前处理试液中的氨基酸进行检测；其中，所述柱前在线衍生化高效液相色谱法中，柱前在线衍生化处理的程序包括：抽取硼酸盐缓冲液，抽取所述前处理试液，混合；用溶剂A洗针，用溶剂B洗针，抽吸邻苯二甲醛，混合；用所述溶剂B洗针，用溶剂C洗针，等待，抽吸9-芴甲氧羰基酰氯，混合；用所述溶剂C洗针，抽吸稀释液，用所述溶剂A洗针，混合；所述溶剂B和所述溶剂C为有机溶剂，所述溶剂A为甲醇、乙腈和水的混合溶液；所述溶剂B甲醇；所述溶剂C为乙腈；所述硼酸盐缓冲液、所述邻苯二甲醛、所述9-芴甲氧羰基酰氯、所述稀释液和所述前处理试液的体积比为0.4～0.7：0.15～0.35：0.15～0.3：7～9：0.3～0.5；所述柱前在线衍生化高效液相色谱法中的色谱条件包括：固定相为C18色谱柱；流动相A包含1.5mM～2.5mM磷酸二氢钾和20mM～30mM磷酸氢二钾的水溶液；流动相B包含体积比为38～52:47～52:8～12的甲醇、乙腈和水的混合溶液；洗脱方式采用梯度洗脱；梯度洗脱的程序包括：0min～0.35min，所述流动相A的体积百分比为95％～99％；0.35min～15min，所述流动相A的体积百分比由95％～99％下降到40％～45％；15min～15.1min，所述流动相A的体积百分比由40％～45％下降到0％；15.1min～17.6min，所述流动相A的体积百分比保持0％；17.6min～17.7min，所述流动相A的体积百分比由0％升高到90％～98％；17.7min～25min，所述流动相A的体积百分比保持90％～98％。

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