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申请/专利权人：国纳之星(上海)纳米科技发展有限公司;上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司
摘要：本发明提供了一种灌木小甘菊叶片组培再生体系的建立方法，包括以下步骤：首先选择无病虫害、幼嫩的灌木小甘菊叶片为外植体，将叶片灭菌消毒后接种于诱导培养基中培养20～25d得到愈伤组织，接着将愈伤组织转移到分化培养基中培养25～30d，最后将诱导出的芽转移到生根培养基中生根培养25～30d形成完整植株。通过上述方法建立的灌木小甘菊叶片组培再生体系能够高效地获得其外植体再生苗，为构建灌木小甘菊的高效遗传转化体系奠定基础，为优良品种的培育繁殖提供技术参考。
主权项：1.一种灌木小甘菊叶片组培再生体系的建立方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一，外植体消毒：选择灌木小甘菊叶片作为外植体，置于流水下冲洗干净后转移至超净工作台中，依次用酒精浸泡，无菌水冲洗，再用次氯酸钠溶液震荡消毒，无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸干水分；步骤二，愈伤组织诱导：将步骤一处理后的外植体叶片在无菌滤纸上用刀片切成小块并在背部划出数个伤口，之后将叶片正面向上接种到诱导培养基中培养20～25d后得到愈伤组织；其中，所述诱导培养基包括MS基本培养基，6苄氨基腺嘌呤6-BA1.0mgL，萘乙酸NAA0.05mgL，蔗糖30gL和琼脂7gL；MS基本培养基为4.43gL；步骤三，分化培养：将步骤二中获到的愈伤组织转移至分化培养基中培养25～30d，培养出灌木小甘菊不定芽；所述分化培养基包括MS基本培养基、6-BA0.5mgL、NAA0.1mgL、蔗糖30gL和琼脂7gL；步骤四，生根培养：将步骤三中获得的丛生不定芽切成单株，转移至生根培养基中培养25～30d后诱导生根，培养出灌木小甘菊无菌再生苗；所述生根培养基包括12MS培养基、NAA0.2mgL、蔗糖30gL、琼脂7gL。
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