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申请/专利权人：海南大学
摘要：本发明公开了一种构建瓜实蝇内源表达Cas9品系的方法，包括：扩增Cas9片段、瓜实蝇vasa基因组序列中的上下游调控序列片段、质粒骨架序列片段和表型标记基因片段；组装各片段，得无缝克隆产物；转化大肠杆菌，得阳性克隆菌液；提取获得质粒；将质粒与辅助质粒混合，注射至瓜实蝇白眼品系的卵中，孵化培养获得成虫，得G0代；将G0代与白眼瓜实蝇杂交，筛选橙黄色子代，得G1代，G1代相互杂交；逐代自交，获得瓜实蝇vasa:Cas9品系。该品系能持续稳定表达，且主要在生殖细胞稳定表达，有助于提高基因编辑的效率，稳定性，重现性，而且也有利于在生殖细胞产生基因编辑，从而能提高获得突变品系的频率，降低筛选工作量。
主权项：1.一种构建瓜实蝇内源表达Cas9品系的方法，其特征在于，包括以下步骤：1扩增Cas9片段；扩增瓜实蝇vasa基因组序列中包含5’UTR的上游调控序列片段和包含3’UTR的下游调控序列片段；扩增包含piggyBac5’和3’反向重复序列的质粒骨架序列片段；扩增表型标记基因片段；2利用无缝克隆技术组装步骤1各片段，得无缝克隆产物；3将无缝克隆产物转化大肠杆菌，获得阳性克隆菌液；4将阳性克隆菌液进行扩大培养，提取获得无内毒素质粒；5将步骤4获得的质粒与辅助质粒混合，注射至瓜实蝇白眼品系的卵中，将卵孵化，培养获得成虫，得G0代瓜实蝇；6将G0代瓜实蝇与白眼瓜实蝇杂交，筛选出橙黄色子代，获得G1代，G1代相互杂交；7逐代自交，获得瓜实蝇vasa:Cas9品系。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 海南大学 一种构建瓜实蝇内源表达Cas9品系的方法
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