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申请/专利权人：上海市第四人民医院

摘要：本发明提供了一种针对ALS、APOC3、C3、FCN2蛋白的拉曼分析方法与生物应用。首先，化学合成制备棒状金纳米颗粒金纳米棒作为SERS探针的拉曼增强基底材料。其次，对金纳米棒表面进行修饰改性，调节其表面的亲疏水性，构建在不同血液样本血液、血浆、血清中结构稳定、分散性好的金纳米棒分散液。随后，以多种含有巯基、氨基、羧基等基团的化学分子作为拉曼信号分子，与ALS、APOC3、C3和FCN2的抗体进行共同修饰，制备相关蛋白的SERS探针。该分析芯片具有灵敏度高、选择性好、线性范围宽、分析操作简单、检测速度快、结果准确度高的特点，在10min内可实现血液样本中ALS、APOC3、C3及FCN2蛋白的快速、准确、灵敏分析检测，为临床相关疾病风险预警提供指标量化依据。

主权项：1.一种针对ALS、APOC3、C3、FCN2蛋白的拉曼分析方法，其特征在于，包括如下步骤：A、SERS增强基底制备金纳米种子溶液制备：将0.3～0.6mM的HAuCl4溶液与0.15～0.35M的表面活性剂等体积混合，在搅拌下加入体积为上述混合体积的3.5％～17％、浓度为5～15mM冰镇的还原剂溶液，等待溶液由金黄色转变为棕黄色；而后将反应体系置于10～50℃水浴环境中反应1～5min，取出后将反应溶液转移至10～50℃环境中得到金种子溶液，保存备用；种子生长溶液配置：向0.15～0.35M的表面活性剂中加入不同体积的3～6mMAgNO3溶液、与表面活性剂等体积的0.5～2mM的HAuCl4溶液，同时向上述溶液中加入0.05～0.09M的还原剂溶液，待搅拌均匀后，向其中加入所述金种子溶液，得到不同长径比的金纳米棒；将混合液置于10～50℃水浴中保温10～30min后，将上述溶液在3000～8000rpm下离心3～10min，多次洗涤后，重新分散并置于0～10℃下恒温保存，B、拉曼分析探针构建将步骤A中制备得到的金纳米棒溶液加入至5～200倍体积、浓度为1～50mM的表面改性活性剂中，在20～40℃水浴条件下，恒温搅拌8～15小时；而后在3000～8000rpm下离心3～10min，将沉淀多次洗涤后备用；依据不同的目标分析蛋白，分别向ALS、APOC3、C3、FCN2蛋白的拉曼信号分子溶液中加入表面改性的金纳米棒溶液，将上述反应体系在20～40℃水浴条件下，恒温搅拌8～15小时进行拉曼信号分子靶向修饰；上述溶液离心后将沉淀重新分散在pH为3～8的溶剂中，并向其中加入依次对应ALS、APOC3、C3、FCN2的抗体，而后向体系分别加入N-3-二甲基氨基丙基-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC及N-羟基丁二酰亚胺NHS混合偶联剂；将上述反应体系在20～40℃水浴条件下，恒温搅拌8～15小时，进行抗体靶向分子修饰；将溶液以同样条件继续离心、洗涤沉淀后获得抗体与信号分子修饰的拉曼光谱探针，而后保存在0～10℃下备用，得到ALS探针、APOC3探针、C3探针、FCN2探针，C、检测依据靶标蛋白的不同，在改性金纳米棒表面修饰不同的靶向蛋白抗体，制备特异性识别拉曼光谱探针探针；将0.5～2μM探针与2～3倍体积的检测样本混合，在30～80℃下孵育后，采用波长为532nm、633nm或785nm，功率为0.5～5mW，曝光时间为0.5～2s的参数对样本拉曼光谱信号进行采集，测试检测样本中拉曼光谱探针对靶标蛋白的响应情况。

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