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申请/专利权人：南京京达生物技术有限公司
摘要：本发明公开了一种抗乙型肝炎单克隆抗体快速免疫方法，制备乙型肝炎表面抗原、核心抗原和e抗原载体蛋白偶联物，选择6‑8周龄的小鼠，进行单独分区饲养，将乙肝蛋白抗原偶联物与完全佐剂混匀，对小鼠进行皮下免疫，2周后，对麻醉后的小鼠进行脾内免疫，再过一周后处死小鼠，取出脾脏，将其置于培养液中体外免疫培养，3天后取上清进行效价检测。本发明建立了一种抗乙型肝炎单克隆抗体快速免疫的方法，通过将三种抗原偶联到载体蛋白上对小鼠进行免疫，经过一次融合可以获得三种乙型肝炎单克隆抗体，缩短免疫周期，降低成本，提高筛选效率。
主权项：1.一种抗乙型肝炎单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、制备乙肝抗原蛋白偶联物；S2、选择6-8周龄的小鼠，进行单独分区饲养；S3、将乙肝抗原蛋白偶联物与弗氏完全佐剂按1:1的比例充分乳化混匀，每只小鼠皮下多点注射免疫抗原，注射剂量为50ug每只；S4、初次免疫2周后，使用乙醚对小鼠进行麻醉；S5、剪开腹部表皮及腹腔膜，将脾脏轻轻固定后向其注射50μg乙肝抗原蛋白偶联物，完成后快速缝合伤口；S6、二次免疫1周后，处死小鼠，制备脾细胞悬液；S7、将脾细胞悬液置于含有15%胎牛血清的培养基中，另添加50μg乙肝抗原蛋白偶联物进行培养；S8、培养3天后，取培养液上清进行效价检测;S1中的操作步骤，将乙型肝炎表面抗原、核心抗原及e抗原按1:1:1的比例与载体蛋白进行偶联；所述载体蛋白选自牛血清白蛋白；所述偶联使用的偶联剂选取1-乙基-3-碳化二亚胺；所述乙肝抗原蛋白偶联物采用ThermoScientific公司的ImjectTMEDCmcKLHSpinKit制备得到。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京京达生物技术有限公司 抗乙型肝炎单克隆抗体快速免疫方法
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