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申请/专利权人:先锋国际良种公司
摘要:本发明涉及用于在基因组中表征DNA序列组成的方法。具体地,本文公开了针对转基因事件进行高通量分析的方法。所述方法使用经剪切的基因组DNA的文库,其连接到专门的接头并且合并以用于序列分析以及与已知基因组和插入序列的比较。所述方法可用于检测表征插入位点、转基因完整性,以及转基因拷贝数。
主权项:1.一种用于在植物的基因组中表征靶序列的方法,所述方法包括:a通过与探针文库杂交,从基因组DNA片段文库捕获包含关注的靶序列的区域的DNA片段,从而富集针对具有所述关注的靶序列的区域的DNA片段的文库,所述探针文库包含对不同的关注的靶序列的区域特异性的探针,其中所述基因组DNA片段文库包含所述关注的靶序列,并且所述文库包含多个基因组DNA片段,其中每个基因组DNA片段在所述片段的每个末端包含接头;b使用接头-特异性PCR引物扩增所富集的DNA片段;c将富集的文库以等摩尔比合并成样品池;d对样品池进行测序以获得读数,其中所述富集的文库包含植物基因组DNA,其中所述植物基因组DNA具有关注的靶序列;e将所述读数过滤并且与对照植物的基因组序列以及与所述关注的靶序列比对,其中步骤e包括从进一步分析中排除任何内源读数;f选择与所述关注的靶序列对齐的读数;g从所述选择的读数确定连接序列;以及h使用所述连接序列在所述植物的所述基因组中表征所述关注的靶序列的完整性,其中所述方法还包括通过分析与所述靶序列的读数对齐来表征所述关注的靶序列的完整性,以鉴定所述关注的靶序列的插入、缺失或重排。
全文数据:
权利要求:
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