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申请/专利权人：江苏三黍生物科技有限公司
摘要：本发明公开了一种纯合基因编辑的方法。运用CRISPR‑Cas9系统敲除木薯目的基因，实现目的基因敲除一致，采用遗传标记法鉴别单倍体种子，利用秋水仙素和二甲基亚砜进行加倍处理，实现木薯单倍体育种，靶基因一致率95%以上。
主权项：1.一种纯合基因编辑的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）选取母本木薯为靶基因编辑株系，父本木薯为编辑单倍体诱导株系，进行杂交授粉时单倍体诱导；选取母本木薯中靶基因设计sgRNA，构建基于CRISPR-Cas9载体骨架的基因编辑载体，获得靶基因载体；将靶基因载体转入农杆菌用于侵染木薯愈伤组织，愈伤组织经筛选再生后获得阳性转化母本木薯；选取父本木薯中诱导靶基因设计sgRNA，构建基于CRISPR-Cas9载体骨架的基因编辑载体，将紫色素生成基因连入载体骨架过表达启动子后，获得父本载体；将父本载体转入农杆菌用于侵染木薯愈伤组织，愈伤组织经筛选再生后获得阳性转化父本木薯，对父本木薯进行筛选再生获得单倍体诱导株系；（2）种植阳性转化母本木薯和阳性转化父本木薯并进行诱导杂交，收获杂交种子，筛选单倍体杂交种子；步骤（1）所述父本木薯中诱导靶基因包括BBM1和母本选择靶基因GBSS或SBEII。
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百度查询： 江苏三黍生物科技有限公司 一种纯合基因编辑的方法
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