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申请/专利权人：西北农林科技大学
摘要：本发明提供了一种高效筛选奶山羊X、Y精子特异性蛋白的方法：首先采集体型外貌正常、健康无疾病的奶山羊种公羊新鲜精液，稀释后于显微镜下速检，保留活力高、密度大的奶山羊精液。尼龙网过滤精液后，Hoechst33342染液对精子孵育染色，XY精子分选仪分离X、Y精子后制作冻精。解冻分选的精子，使用Hoechst33342染液孵育精子，分析精子纯度。冻精解冻后，选取活力达到0.3以上的精子样本提取蛋白，根据聚丙烯酰胺凝胶电泳条带结果和蛋白浓度定量结果对蛋白样品进行评级。蛋白质样品评级后进行质谱检测，筛选在X、Y精子中的差异蛋白；使用蛋白质免疫印迹验证X、Y精子中的差异表达蛋白。本发明通过流式分选技术得到高纯度的奶山羊X、Y精子，以此为基础进行蛋白组学测序，高效筛选出奶山羊X、Y精子中的差异蛋白，对探究奶山羊X、Y精子中的特殊生理代谢过程，研究差异蛋白对X、Y精子的调控方式，开发高效、简便的性别控制方式，提升种公羊繁殖性能和效率等具有重要意义。
主权项：1.一种高效筛选奶山羊X、Y精子特异性蛋白的方法，其特征在于：包括以下步骤：1精液采集与品质检查：采集体型外貌正常、健康无疾病的奶山羊种公羊精液，稀释后于显微镜下速检，保留活力高、密度大的奶山羊精液；2尼龙网过滤精液后，Hoechst33342染液对精子孵育染色，X、Y精子分选仪分离X、Y精子后制作冻精；3解冻分选的精子，使用Hoechst33342染液孵育精子，分析精子纯度；4冻精解冻后，选取活力达到0.3以上的精子样本提取蛋白，根据聚丙烯酰胺凝胶电泳条带结果和蛋白浓度定量结果对蛋白进行评级；5蛋白质样品评级后进行质谱检测，筛选在X、Y精子中的差异蛋白；6使用蛋白质免疫印迹验证X、Y精子中的差异表达蛋白。
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百度查询： 西北农林科技大学 一种高效筛选奶山羊X、Y精子特异性蛋白的方法
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