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申请/专利权人：华研(深圳)再生医学集团有限公司

摘要：本发明公开了一种用于培养超级记忆NK细胞的培养方法，其包括：包被液、激活培养基和扩增培养基；步骤：1包被培养；2分离纯化NK；3接种培养；4添加所述激活培养基和血浆；5添加所述激活培养基和血浆，加入记忆因子；6洗去记忆因子和激活培养基，分离提纯，使用扩增培养基重悬细胞到新的培养瓶内进行培养，添加血浆并继续培养；7补充扩增培养基和添加血浆；8将培养瓶中的细胞悬液转移到培养袋内，补充扩增培养基和添加血浆；9补充扩增培养基和添加血浆；10在测定结果达标后进行收集；实现培养出高纯度的NK细胞。

主权项：1.一种用于培养超级记忆NK细胞的培养方法，其特征在于，包括：包被液，一份所述包被液包含1支包被因子和2ml磷酸盐缓冲液；激活培养基，一份所述激活培养基包含1支激活因子-1、1支激活因子-2和基础培养基；扩增培养基，一份所述扩增培养基包含1支扩增因子-1、1支扩增因子-2和基础培养基；所述培养方法包括以下步骤：1包被培养，用包被液包被培养培养瓶，包被培养期间培养瓶处于4摄氏度的温度下；2分离纯化NK，对全血进行孵育，并在加入磷酸盐缓冲液后终止孵育，将孵育后的样本添加到装有淋巴分离液的分离管内并使用离心机进行分离提纯，对得到的纯化细胞使用磷酸盐缓冲液清洗，然后再使用离心机进行分离提纯，得到纯化NK细胞；3接种培养，用所述激活培养基将所述纯化NK细胞混匀接种于完成所述包被培养的培养瓶中，然后加入血浆并放置到培养箱内进行培养，培养预定时间后将细胞的粘连部分晃开，然后加入3uiml的低分子肝素，所述培养箱的参数设定为：温度37摄氏度，二氧化碳浓度5％；4培养预定时间后对培养瓶添加所述激活培养基和血浆，然后在所述培养箱内继续进行培养；5培养预定时间后对培养瓶添加所述激活培养基和血浆，继续培养并在预定时间后加入记忆因子，然后继续在所述培养箱内进行培养；6培养预定时间后洗去记忆因子和激活培养基，然后使用离心机进行分离提纯，提纯得到的细胞使用所述扩增培养基重悬到新的培养瓶内进行培养，然后添加血浆并继续在所述培养箱内进行培养；7补充所述扩增培养基和添加血浆，然后继续在所述培养箱内进行培养；8将培养瓶中的细胞悬液转移到培养袋内，补充所述扩增培养基和添加血浆，然后继续在所述培养箱内进行培养；9补充所述扩增培养基和添加血浆，然后继续在所述培养箱内进行培养；10使用细胞计数仪对培养基细胞浓度进行测定，并在测定结果达标后进行收集。

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