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申请/专利权人：大连博源医学科技有限公司

摘要：本发明提供了一种检测血浆中褪黑素浓度的方法。该方法经蛋白沉淀预处理，C18‑E固相萃取柱富集浓缩提取得到样本上清液，使用液相色谱串联质谱LC‑MSMS对目标物进行分析，通过内标法建立标准曲线计算血浆中褪黑素浓度，实现一种更为全面的检测血浆中褪黑素浓度的方法。本方法具有灵敏度高，高通量、简便快捷，提取回收率高的优点，满足多种质谱设备的定量需求，可应用于临床上褪黑素浓度的检测。

主权项：1.检测血浆中褪黑素浓度的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：对待测含褪黑素的血浆样品进行前处理，得到目标样品溶液；对所述目标样品溶液的褪黑素进行测试，计算血浆样品中褪黑素的浓度；其中，对含褪黑素的血浆样品进行前处理得到目标样品溶液的操作为：收集待测含褪黑素的血浆样品，加入内标溶液，涡旋震荡，加入甲醇和乙腈中至少一种以及ZnSO4溶液作为沉淀剂，涡旋混匀，离心，取上清液，加入稀释液，混匀，采用固相萃取柱富集，收集洗脱液，氮气吹干后复溶，取上清液，即得到目标样品溶液；ZnSO4溶液的浓度为3.3molL;待测含褪黑素的血浆样品或标准曲线样本与ZnSO4溶液的体积比为1:1；加入甲醇和乙腈中至少一种以及ZnSO4溶液后涡旋混匀的条件为2000rpm下进行5min；所述固相萃取柱为C18-E固相萃取柱；所述采用固相萃取柱富集，洗脱，收集洗脱液的步骤为：对固相萃取柱进行预处理后上样，依次用淋洗液1和淋洗液2淋洗，再用洗脱液洗脱，收集洗脱液，其中，所述预处理包括先采用活化液对固相萃取柱进行活化处理，再用平衡液将活化后的固相萃取柱平衡；所述活化液为甲醇；所述平衡液为0.01%氨水；所述淋洗液1为水，所述淋洗液2为乙腈，所述洗脱液为乙腈；液相色谱条件为：色谱柱：Waters,ACQUITYUPLCBEHC181.7μmIVD2.1×50mm；柱温40℃；进样器温度4℃；流动相A为水，含0.05mmolL氟化铵；B为甲醇，梯度洗脱：0-0.5min，流动相B由30%升高到35%；0.5-0.8min，流动相B由35%升高到75%；0.8-1.49min，流动相B为75%；1.49-1.50min，流动相B由75%降到30%；1.51-2.00min，流动相B为30%；流速为0.3mLmin；进样量10μL；质谱参数为：离子化模式：ESI+；雾化气流量:3Lmin；加热器流量：12Lmin；接口温度:400℃；DL温度:150℃；加热块温度:150℃；干燥气流量:8Lmin；多反应检测。

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