龙图腾网&IPTOP
- 微信扫码登录
- 账号密码登录
- 短信登录/注册
买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！
申请/专利权人：烟台迈百瑞国际生物医药股份有限公司
摘要：本发明提供了一种抗体游离巯基位点和比例的分析方法。使用两种不同的烷基化试剂分别对抗体的游离巯基和参与形成二硫键的巯基进行烷基化，经蛋白质水解酶处理后，采用液质联用法分析同一肽段中同一位点半胱氨酸上两种烷基化修饰的情况，确定抗体中游离巯基位点和比例。该方法结果准确可靠、灵敏度高、成本低，可以准确分析抗体中游离巯基位点和比例，对理解抗体结构的完整性，稳定性和生物学功能有着重要意义。
主权项：1.一种抗体游离巯基位点和比例的分析方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：1变性取PBS溶液置于超滤离心管中，离心后加入待测抗体，再次离心后加入第一蛋白变性剂进行第一次孵育，得到变性后的待测抗体；2第一次烷基化向变性后的待测抗体中继续添加第一烷基化试剂进行第一次烷基化处理，经过第二次孵育后得到游离巯基被烷基化的待测抗体；3还原将游离巯基被烷基化的待测抗体离心后，加入PBS溶液、第二蛋白变性剂和还原剂进行二硫键的还原，经过第三次孵育后得到二硫键被还原的待测抗体；4第二次烷基化向二硫键被还原的待测抗体中添加第二烷基化试剂进行第二次烷基化处理，经过第四次孵育后得到巯基完全烷基化的待测抗体；5酶解将巯基完全烷基化的待测抗体离心后，添加蛋白质水解酶和缓冲溶液进行酶解反应，甲酸终止反应，所述的待测抗体被酶解成肽段；6液质联用分析采用电喷雾电离四级杆-飞行时间质谱进行分析，利用BioConfirmWorkflow进行数据处理，得到第一次烷基化修饰的肽段质谱信号强度和第二次烷基化修饰的肽段质谱信号强度；7游离巯基比例的确定游离巯基比例％＝第一次烷基化修饰的肽段质谱信号强度肽段总质谱信号强度×100％；其中，肽段总质谱信号强度＝第一次烷基化修饰的肽段质谱信号强度+第二次烷基化修饰的肽段质谱信号强度，步骤1中所述的第一蛋白变性剂和步骤3中所述的第二蛋白变性剂独立的选自盐酸胍、尿素和RapiGestSF，步骤2和步骤4中的第一烷基化试剂和第二烷基化试剂独立地选自N-马来酰亚胺、碘乙酰胺；所述的第一烷基化试剂和第二烷基化试剂不相同。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 烟台迈百瑞国际生物医药股份有限公司 一种抗体游离巯基位点和比例的分析方法及其应用
免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。
主营中国专利交易买卖与专利转让许可,高校科技成果推广与科技成果转化,知识产权运营管理与平台开发,科技人才专家库与科技猎头等科技服务
开放平台
担保交易
惠及多方
会员特惠
专属平台
适合多方
数据共享
功能齐全
皖公网安备 34010402703815号