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申请/专利权人：南京农业大学

摘要：本发明涉及环境污染物生物处理技术领域，具体涉及一组降解邻苯二甲酸酯的功能菌群驯化方法，包括以下步骤：S1、S菌群富集与驯化；S2、S菌群梯度驯化；S3、S菌群菌悬液制备；S4、获取PAEs污染作物；S5、Y菌群富集与驯化；S6、Y菌群菌悬液制备；S7、混合：将步骤S3中得到的S菌群菌悬液与步骤S6中得到的Y菌群菌悬液以3:1的质量比混合，得到强化功能菌群菌悬液。本发明通过回收利用活性污泥并将DMP、DEP、DBP作为唯一碳源和能源进行生长繁殖，得到S菌群菌悬液，可在36h内将初始浓度为10mgL的混合PAEs几乎降解完全，降解率均超过95%，将其应用在有毒有机污染物的生物降解中具有巨大应用潜能。

主权项：1.一组降解邻苯二甲酸酯的功能菌群驯化方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、S菌群富集与驯化：按重量份计，取1~1.5份活性污泥放置于2~3份无机盐培养基中，向所述无机盐培养基中添加PAEs混合溶液，使得无机盐培养基中PAEs的质量浓度为6~14mgL，在室温条件下持续搅拌进行驯化培养3周，得到一次菌悬液，所述活性污泥取自生活污水处理厂二沉池；S2、S菌群梯度驯化：S2-1、将所述一次菌悬液进行转接：取1~1.5份一次菌悬液，加入到2~3份无机盐培养基中，向所述无机盐培养基中添加PAEs混合溶液，在室温条件下持续搅拌进行驯化培养3周，得到二次菌悬液；S2-2、重复步骤S2-1的转接操作五次，并使每次转接后无机盐培养基中PAEs的质量浓度分别对应为40mgL、60mgL、80mgL、100mgL、120mgL，当最后一次转接完成后继续驯化培养3周，得到含有S菌群的六次菌悬液，取出1~1.5份所述六次菌悬液，将其与体积分数为30~40%的甘油按体积比1:1混合，于超低温条件下保存得到含有S菌群的冻干甘油备用；S3、S菌群菌悬液制备：将步骤S2中得到的含有S菌群的冻干甘油用接种环刮取1~1.5份，接种到25~30份灭菌后的LB培养基中，在室温条件下持续搅拌进行活化培养24h，得到初步活化的菌悬液，将所述初步活化的菌悬液置于离心机中离心处理，弃去上清液得到菌体液，用无机盐溶液洗涤菌体液，重复所述离心和无机盐溶液洗涤步骤三次后，将菌体液置于18~20份无机盐培养基中，并将菌体液的OD600值调整到1.0，静置2~3h得到S菌群菌悬液，置于低温条件下保存备用；S4、获取PAEs污染作物：取PAEs污染土壤，向其中加入步骤S3中制备的S菌群菌悬液，PAEs污染土壤与S菌群菌悬液的质量比为100:1，将PAEs污染土壤与S菌群菌悬液混合均匀后静置48h，随后开始在修复后的PAEs污染土壤上进行植物种植，一个种植周期后收获PAEs污染作物；S5、Y菌群富集与驯化：将PAEs污染作物晒干后研磨过200目筛得到PAEs污染作物研磨粉末，取1~1.5份PAEs污染作物研磨粉末放置于2~3份无机盐培养基中，向所述无机盐培养基中添加PAEs混合溶液，使得无机盐培养基中PAEs的质量浓度为6~14mgL，在室温条件下持续搅拌进行驯化培养3周，得到一次强化菌悬液，将所述一次强化菌悬液按照步骤S2中的转接方法转接重复转接五次，得到含有Y菌群的六次强化菌悬液，将其与体积分数为30%的甘油按体积比1:1混合，于超低温条件下保存得到含有Y菌群的冻干甘油备用；S6、Y菌群菌悬液制备：将步骤S5中得到的含有Y菌群的冻干甘油用接种环刮取1~1.5份，接种到25~30份灭菌后的LB培养基中，在室温条件下持续搅拌进行活化培养24h，得到初步活化的强化菌悬液，将所述初步活化的强化菌悬液置于离心机中离心处理，弃去上清液得到强化菌体液，用无机盐溶液洗涤强化菌体液，重复所述离心和无机盐溶液洗涤步骤三次后，将强化菌体液置于18~20份无机盐培养基中，并将强化菌体液的OD600值调整到1.0，静置2~3h得到Y菌群菌悬液，置于低温条件下保存备用；S7、混合：将步骤S3中得到的S菌群菌悬液与步骤S6中得到的Y菌群菌悬液以3:1的质量比混合，得到强化功能菌群菌悬液；所述室温的温度为30℃，所述搅拌的转速为150rpm，所述超低温的温度为-80℃，所述低温的温度为4℃。

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