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申请/专利权人：恩替(苏州)生物科技有限公司
摘要：本发明公开了一种通过干扰GPR132增强NK细胞功能的方法及其应用，包括以下步骤：S1、pLL3.7‑GPR132‑shRNA干扰质粒的构建；S2、pLL3.7‑shRNA‑2NC‑NKG2D‑CAR靶向质粒的构建；S3、慢病毒的包装和病毒滴度测定；S4、NK92细胞培养；S5、感染NK92细胞测定GPR132的干扰效率；S6、检测GPR132敲低的NK92对K562的杀伤能力；S7、检测GPR132敲低的NK92中活化因子的表达水平；S8、检测GPR132敲低的NK92的增殖和抗凋亡能力；S9、检测GPR132敲低的CAR‑NK的细胞毒性；S10、检测靶向人NKG2DL的NKG2D‑CAR‑NK细胞对结肠癌细胞的杀伤能力。本发明阐明了GPR132对NK功能的调控作用。在NK细胞中下调GPR132增强了NK细胞效应、增殖和抗凋亡能力，从而增强了NK细胞的细胞毒性。同时，在CAR‑NK的应用方面，GPR132的下调显著提高了CAR‑NK92的细胞毒性，瘤内存活能力和结肠癌清除能力。
主权项：1.一种通过干扰GPR132增强NK细胞功能的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、pLL3.7-GPR132-shRNA干扰质粒的构建；S2、pLL3.7-shRNA-2NC-NKG2D-CAR靶向质粒的构建；S3、慢病毒的包装和病毒滴度测定；S4、NK92细胞培养；S5、感染NK92细胞测定GPR132的干扰效率；S6、检测GPR132敲低的NK92对K562的杀伤能力；S7、检测GPR132敲低的NK92中活化因子的表达水平；S8、检测GPR132敲低的NK92的增殖和抗凋亡能力；S9、检测GPR132敲低的CAR-NK的细胞毒性；S10、检测靶向人NKG2DL的NKG2D-CAR-NK细胞对结肠癌细胞的杀伤能力。
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