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申请/专利权人:中国科学院北京基因组研究所(国家生物信息中心)
摘要:本发明提供了一种同时获取基因组遗传变异和甲基化修饰的文库构建方法及应用。该方法包括A对片段化的待测样本进行末端修复后变性,获取单链片段;B在DNA聚合酶催化反应的条件下,使单链DNA的3’端形成发夹结构,并以单链DNA形成的一侧的茎链为模板继续合成至形成发夹结构另一侧的茎链,得到一端为发夹结构的双链片段,且反应体系的dNTP中的dCTP为甲基化修饰的胞嘧啶;C在未形成发夹结构的一端连接测序接头,转化后扩增片段,得到两端均为接头序列的片段构成测序文库。该方法具有不引入外源发夹序列,操作步骤简单,构建的文库可同时获取遗传和甲基化信息,且文库构建效率高的优点。
主权项:1.一种同时获取单分子上遗传变异和表观遗传甲基化修饰信息的文库构建方法,其特征在于,包括:A对片段化的待测样本进行末端修复后变性,获取单链片段;B在DNA聚合酶催化反应的条件下,使单链DNA的3’端形成发夹结构,并以所述单链DNA形成的一侧的茎链为模板继续合成至形成发夹结构另一侧的茎链,得到一端为发夹结构的双链片段;反应体系的dNTP中的dCTP为甲基化修饰的胞嘧啶;C在未形成发夹结构的一端连接测序接头,转化后扩增片段,得到两端均为接头序列的片段构成测序文库;所述转化使未甲基化的胞嘧啶转化为其他种类碱基。
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