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申请/专利权人:南京松天盛科生物科技有限公司
摘要:本发明涉及层析独立C线DNP偶联BSA技术领域,具体为层析独立C线DNP偶联BSA以及其多克隆抗体的制备与精纯,包括步骤一:偶联S1、将加热搅拌离心装置,然后设置80℃,打开加热开关;S2、称量53mg的2,4‑二硝基苯甲酸放在水浴容器内,然后加入5mL20mMpH7.4PBS,在加热搅拌离心装置中温浴3‑5min中,将固体溶解;S3、称量57.5mgNHS和143.8mg的EDC,用2mL的PBS溶解,加入到溶解好的2,4‑二硝基苯甲酸中,震荡反应4h。采用的2,4‑二硝基苯酚的类似物2,4‑二硝基苯甲酸,该物质无毒无害,偶联方法简单,对环境无影响,本装置使用简单便捷,且适用性十分广泛,同时能够进行水浴加热和搅拌的工作,同时用户在离心时亦能够提高使用的安全性。
主权项:1.层析独立C线DNP偶联BSA多克隆抗体的制备,其特征在于:包括:步骤一:偶联S1、将加热搅拌离心装置,然后设置80℃,打开加热开关;S2、称量53mg的2,4-二硝基苯甲酸放在水浴容器内,然后加入5mL20mMpH7.4PBS,在加热搅拌离心装置中温浴3-5min中,将固体溶解;S3、称量57.5mgNHS和143.8mg的EDC,用2mL的PBS溶解,加入到溶解好的2,4-二硝基苯甲酸中,震荡反应4h;S4、称量32mgBSA,用1mLPBS溶解,缓慢滴加到上述反应液中,常温反应12-24h;S5、透析到20mMpH7.4PBS,每4h换液一次,共换4-6次;S6、透析结束后,用PBS做空白,用微量分光光度计测BSADNPDNP-BSA的全波长,观察偏移情况确定是否偶联上;步骤二:免疫S1、取3只8周龄的新西兰大白兔;S2、首免取1mg的抗原和1mL完全弗氏佐剂混匀,免疫大白兔后背六个点进行免疫;S3、每隔两个星期取1mg的抗原和1mL不完全弗氏佐剂混匀加免一次;S4、第四次测定效价,当效价达到1:640000时,采取耳静脉持续采血;S5、最后心脏采血处死;S1中的加热搅拌离心装置包括主体(1)、万能机构、离心机构和安全机构,所述主体(1)的一端均匀开设有四组水浴仓(2),所述水浴仓(2)的顶端皆开设有装夹仓(3),所述水浴仓(2)的底端皆开设有动力仓(4),所述水浴仓(2)的内壁皆对称设置有加热板(5),所述水浴仓(2)的内壁皆对称设置有水泵(6),且水泵(6)与加热板(5)间隔分布,所述水泵(6)的输出端连接有分散头(7),所述水泵(6)和分散头(7)皆为四十五度倾斜向上,所述水浴仓(2)的内部皆设置有多孔升降板(8),且多孔升降板(8)的底端皆与水浴仓(2)滑动连接,所述多孔升降板(8)的顶端皆设置有温度检测器(9),所述动力仓(4)的内部皆设置有第一电机(10),所述第一电机(10)的输出端皆固定连接有转套(11),且转套(11)的中部皆通过旋转密封件与动力仓(4)的内壁相连接,所述多孔升降板(8)的内部转动连接有转板(12),所述转板(12)的底端固定连接有调节转杆(13),且调节转杆(13)的底端与转套(11)滑动连接,所述转套(11)的表面均匀开设有四组滑槽(14),所述滑槽(14)的内部皆滑动连接有滑块(15),且滑块(15)的一端皆分别与转套(11)的内壁固定连接,所述多孔升降板(8)的底端皆对称设置有电推杆(16),且电推杆(16)的底端皆与动力仓(4)的内壁固定连接;所述万能机构包括双齿转环(17)、第二电机(18)、第一齿轮(19)、密封转件(20)、固定转杆(21)、第二齿轮(22)、导向弧槽(23)和导向杆(24),所述装夹仓(3)底端的内壁皆通过轴承连接有双齿转环(17),所述装夹仓(3)顶端的内壁皆设置有第二电机(18),所述第二电机(18)的输出端皆固定连接有第一齿轮(19),且第一齿轮(19)皆分别与双齿转环(17)的外壁相啮合,所述装夹仓(3)的内部设置皆有五组密封转件(20),所述密封转件(20)的一端固定连接有固定转杆(21),且固定转杆(21)的两端皆与装夹仓(3)的内壁通过轴承相连接,所述固定转杆(21)的底端皆固定连接有第二齿轮(22),且第二齿轮(22)皆分别与双齿转环(17)的内壁相啮合,所述装夹仓(3)顶端的内壁皆开设有五组导向弧槽(23),所述导向弧槽(23)的内部皆滑动连接有导向杆(24),且导向杆(24)的底端皆分别密封转件(20)固定连接;所述离心机构包括离心仓(25)、固定件(26)、连接转件(27)、第三电机(28)、安全离心箱(29)、固定试管件(30)、转盖(31)、橡胶压片(32)和闭合盖板(33),所述主体(1)的一端开设有离心仓(25),所述离心仓(25)的中下部固定连接有固定件(26),所述固定件(26)的内部转动连接有连接转件(27),所述离心仓(25)底端的内壁设置有第三电机(28),且第三电机(28)的输出端与连接转件(27)固定连接,所述连接转件(27)的顶端固定连接有安全离心箱(29),所述安全离心箱(29)的内部固定连接有固定试管件(30),所述主体(1)的顶端通过转轴连接有闭合盖板(33),所述安全离心箱(29)的顶端通过螺纹连接有转盖(31),所述转盖(31)顶端的内壁固定连接有橡胶压片(32),所述第三电机(28)的控制端皆通过外接开关与外界电源电性连接;所述安全机构包括行程开关(34)、移动槽(35)、穿槽(36)、移动板(37)、锁紧件(38)、通槽(39)、双轴电机(40)和螺纹杆(41),所述主体(1)的顶端设置有行程开关(34),且行程开关(34)位于闭合盖板(33)一端的底部,所述主体(1)的一端对称开设有移动槽(35),所述移动槽(35)相互靠近一侧的中部皆开设有穿槽(36),且穿槽(36)的一端皆与离心仓(25)相连接,所述移动槽(35)的内部皆滑动连接有移动板(37),所述穿槽(36)的内部皆滑动连接有锁紧件(38),且锁紧件(38)的一端皆与移动板(37)的中部固定连接,所述主体(1)的一端对称开设有通槽(39),且通槽(39)的两端皆分别与移动槽(35)的两端相连接,所述通槽(39)的中部皆设置有双轴电机(40),且双轴电机(40)的输出端皆固定连接有螺纹杆(41),且螺纹杆(41)的一端皆分别与移动板(37)两端通过螺纹相连接。
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