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申请/专利权人：首都儿科研究所
摘要：本发明公开了一种用于核酸检测的CRISPR介导的单管一步法检测方法，具体地，其包括：（1）将待测样本的DNA模板、MCDA引物、DNA聚合酶、ApaCas12b‑gRNA复合物、荧光探针混合，得到反应体系；（2）在恒定温度下，将（1）中反应体系进行MCDA介导的等温扩增、基于CRISPRCas12b的反式切割反应；所述的MCDA引物包括置换引物、扩增引物、交叉引物，所述的交叉引物包含PAM位点，ApaCas12b‑gRNA复合物中gRNA与靶序列互补，所述的荧光探针为ssDNA探针。
主权项：1.一种非诊断目的的基于CRISPR的单管一步法检测肺炎支原体靶序列的方法，其包括：（1）将待测样本的DNA模板、MCDA引物、DNA聚合酶、AapCas12b-gRNA复合物、荧光探针混合，得到反应体系；（2）在恒定温度下，将（1）中反应体系进行MCDA介导的等温扩增、基于CRISPRCas12b的反式切割反应；所述的MCDA引物包括置换引物、扩增引物、交叉引物，所述的交叉引物包含PAM位点，AapCas12b-gRNA复合物中gRNA与靶序列互补，所述的荧光探针为ssDNA探针；所述的置换引物包括F1和F2，所述的扩增引物包括C1，D1，R1，C2，D2和R2，所述的交叉引物包括CP1*和CP2；所述的F1的序列如SEQIDNO.1所示，所述的F2的序列如SEQIDNO.2所示，所述的C1的序列如SEQIDNO.6所示，所述的D1的序列如SEQIDNO.7所示，R1的序列如SEQIDNO.8所示，所述的C2的序列如SEQIDNO.9所示，所述的D2的序列如SEQIDNO.10所示，所述的R2的序列如SEQIDNO.11所示，所述的CP1*的序列如SEQIDNO.4所示，所述的CP2的序列如SEQIDNO.5所示；所述的AapCas12b-gRNA复合物中的gRNA的序列如SEQIDNO.12所示；所述的荧光探针的序列如SEQIDNO.13所示。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 首都儿科研究所 一种用于核酸检测的CRISPR介导的单管一步法检测方法
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